Pas de données CRISPR : l'image illustre la qualité de l'anticorps pour la visualisation des résultats de l'expérience CRISPR.
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Plasmide CRISPR/Cas9 KO HERG (h): sc-401143
- Espèces cibles: human
- 20 µg d'ADN plasmidique purifié et prêt à transfecter; Jusqu'à 20 transfections
- HERG Le plasmide CRISPR/Cas9 Knockout (KO) (h) est un ensemble de plasmides, chacun codant pour la nucléase Cas9 et un ARN guide (gRNA) de 20 nt spécifique à la cible, conçu pour une efficacité de knockout maximale à l'aide de séquences issues de la bibliothèque GeCKO v2
- Les séquences d'ARN guide (gRNA) dirigent Cas9 pour induire des cassures double brin (DSB) spécifiques au site dans le locus génomique HERG, entraînant un knock-out génique par jonction non homologue (NHEJ)
- Les gènes de résistance à la puromycine et RFP sont flanqués de sites LoxP, permettant la suppression des marqueurs de sélection via la recombinase Cre (Cre Vector : sc-418923) après l'établissement de lignées cellulaires knock-out stables
- Après transfection, l'efficacité de knockout de gène peut être évaluée par WB, IF ou IHC en utilisant l'anticorps: HERG Antibody (F-12): sc-377388
Informations pour la commande
| Nom du produit | Ref. Catalogue | COND. | Prix HT | QTÉ | Favoris | |
Plasmide CRISPR/Cas9 KO HERG (h) | sc-401143 | 20 µg | $397.00 |
Présentation
KCNH2 code le canal potassique humain HERG (Kv11.1) dépendant du voltage, un médiateur clé du courant rectificateur retardé rapide (IKr) qui façonne la repolarisation de phase 3 du potentiel d’action cardiaque. L’activité de HERG s’intègre à des réseaux plus larges de canaux ioniques et à des programmes d’excitabilité membranaire pour contrôler la durée du potentiel d’action, la réfractarité et la rythmicité. Une altération de la fonction de KCNH2 est fortement associée à des phénotypes d’arythmie héréditaires et acquis, notamment le syndrome du QT long, et constitue un nœud central de la recherche en électrophysiologie et en pharmacologie de sécurité. Au-delà des cardiomyocytes, l’expression de KCNH2 a été étudiée dans des contextes excitables et non excitables où la conductance potassique influence la prolifération et les états de signalisation cellulaire.
Le plasmide CRISPR/Cas9 KO HERG (h) est un ensemble de plasmides conçus pour la disruption ciblée du gène KCNH2 dans les lignées cellulaires human. Chaque plasmide co-exprime un ARN guide unique (sgRNA) ciblant un site distinct au sein du KCNH2, ainsi que la nucléase Cas9 de Streptococcus pyogenes. Les plasmides codent également pour la GFP, ce qui permet l'identification par fluorescence et l'enrichissement des cellules transfectées avec succès par microscopie à fluorescence ou cytométrie en flux.
La conception multi-guide augmente la probabilité de générer des insertions ou des délétions (indels) qui perturbent le cadre de lecture ouvert KCNH2 à la suite de la formation de cassures double brin médiées par Cas9. Les cassures d'ADN introduites par le système CRISPR/Cas9 sont réparées par des voies endogènes de jonction non homologue (NHEJ), ce qui entraîne fréquemment des mutations par décalage du cadre de lecture qui suppriment l'expression de la protéine HERG.
Ce système de knock-out CRISPR permet la génération efficace de modèles cellulaires déficients en KCNH2 pour l'étude de la signalisation de HERG, les études de génomique fonctionnelle, la recherche en biologie du cancer et l'évaluation des réponses thérapeutiques dans des lignées cellulaires humaines.
Caractéristiques principales
- sgRNA ciblant le ou les exons de KCNH2 essentiels à la fonction de HERG
Co-expression de SpCas9 et de sgRNA à partir d'un seul plasmide pour une administration simplifiée
Rapporteur GFP pour l'identification des cellules transfectées
Pool de plasmides ciblant plusieurs sites génomiques de KCNH2 pour améliorer l'efficacité du knock-out
Compatible avec l'administration par transfection
Variantes de conception
CRISPR +/- HDR
- Les gRNA codés par le HERG plasmide CRISPR/Cas9 KO (h) et le HERG plasmide CRISPR/Cas9 KO (h2) ciblent des sites distincts au sein du locus KCNH2. Une ou les deux conceptions de ciblage peuvent être disponibles. Voir les produits associés pour connaître la disponibilité.
Les constructions donneuses HDR codées par le HERG plasmide HDR (h) et le HERG (h2) contiennent une cassette de résistance à la puromycine et un rapporteur RFP flanqué de bras d'homologie KCNH2 pour permettre la réparation dirigée par homologie au niveau de sites cibles KCNH2 définis correspondant aux conceptions CRISPR/Cas9 KO. La disponibilité des donneurs HDR peut varier. Voir les produits associés pour connaître la disponibilité.
Réservé à la recherche. N'est pas destiné à un usage diagnostique ou thérapeutique.