HECTD1 CRISPR/Cas9 KO Plasmid (m): sc-431500

Übersicht

Hectd1 kodiert HECTD1, eine E3-Ubiquitin-Ligase vom HECT-Typ, die die Übertragung von Ubiquitin auf Substratproteine katalysiert und dadurch deren Stabilität sowie die Signalweiterleitung reguliert. In Mauszellen wird HECTD1 mit der Kontrolle des Proteinumsatzes und stressabhängiger Signalwege in Verbindung gebracht und beeinflusst dabei die Organisation des Zytoskeletts, die Zellpolarität sowie Prozesse, die die Gewebemorphogenese und die Entwicklungsmusterbildung prägen. Durch die Modulation ubiquitinabhängiger Signalknoten kann HECTD1 Signalwege beeinflussen, die Proliferation, Differenzierung und Apoptose steuern. Eine Fehlregulation der Aktivität von Ubiquitin-Ligasen ist allgemein für Krankheitsmechanismen relevant, die mit einem Ungleichgewicht der Proteostase, aberranter Signalgebung und Entwicklungsdefekten einhergehen, wodurch Hectd1 ein nützliches Ziel für mechanistische Studien in Säugersystemen darstellt.

Das HECTD1 CRISPR/Cas9-KO-Plasmid (m) ist ein Pool von Plasmiden, die für die gezielte Disruption des Hectd1-Gens in mouse-Zelllinien entwickelt wurden. Jedes Plasmid koexprimiert eine einzigartige Single-Guide-RNA (sgRNA), die auf eine bestimmte Stelle innerhalb des Hectd1-Gens abzielt, zusammen mit der Streptococcus pyogenes Cas9-Nuklease. Die Plasmide kodieren zudem für GFP, was die fluoreszente Identifizierung und Anreicherung erfolgreich transfizierter Zellen mittels Fluoreszenzmikroskopie oder Durchflusszytometrie ermöglicht.

Das Multi-Guide-Design erhöht die Wahrscheinlichkeit, dass Insertionen oder Deletionen (Indels) entstehen, die den offenen Leserahmen von Hectd1 nach der Cas9-vermittelten Bildung von Doppelstrangbrüchen unterbrechen. Durch das CRISPR/Cas9-System verursachte DNA-Brüche werden über endogene NHEJ-Wege (Non-Homologous End Joining) repariert, was häufig zu Frameshift-Mutationen führt, die die HECTD1-Proteinexpression aufheben.

Dieses CRISPR-Knockout-System ermöglicht die effiziente Erzeugung von Hectd1-defizienten Zellmodellen zur Untersuchung der HECTD1-Signalübertragung, für funktionelle Genomstudien, in der Krebsbiologieforschung sowie zur Bewertung therapeutischer Reaktionen in menschlichen Zelllinien.

Hauptmerkmale

• sgRNAs, die auf Hectd1-Exone abzielen, die für die HECTD1-Funktion entscheidend sind
  Ko-Expression von SpCas9 und sgRNA aus einem einzigen Plasmid zur vereinfachten Verabreichung
  GFP-Reporter zur Identifizierung transfizierter Zellen
  Pool von Plasmiden, die auf mehrere Hectd1-Genomstellen abzielen, um die Knockout-Effizienz zu verbessern
  Kompatibel mit der Verabreichung durch Transfektion

Designvarianten

CRISPRs +/- HDRs

• gRNAs, die vom HECTD1 CRISPR/Cas9-KO-Plasmid (m) und vom HECTD1 CRISPR/Cas9-KO-Plasmid (m2) kodiert werden, zielen auf unterschiedliche Stellen innerhalb des Hectd1-Lokus ab. Es kann ein oder beide Targeting-Designs verfügbar sein. Siehe „Verwandte Produkte“ für Verfügbarkeit.
  HDR-Donorkonstrukte, kodiert durch das HECTD1 HDR-Plasmid (m) und HECTD1 HDR-Plasmid (m2) kodiert, enthalten eine Puromycin-Resistenzkassette und einen RFP-Reporter, flankiert von Hectd1-Homologiearmen, um die homologe Reparatur an definierten Hectd1-Zielstellen entsprechend den CRISPR/Cas9-KO-Designs zu unterstützen. Die Verfügbarkeit von HDR-Donoren kann variieren. Siehe „Verwandte Produkte“ für Verfügbarkeit.

Nur für Forschungszwecke. Nicht für diagnostische oder therapeutische Zwecke bestimmt.