HECTD1 Plásmido CRISPR/Cas9 KO (h): sc-409864

Descripción general

HECTD1 codifica una ligasa E3 de ubiquitina tipo HECT que media la ubiquitinación de sustratos para regular la proteostasis, el recambio proteico y la amplitud de la señalización en múltiples contextos celulares. Al controlar el tráfico y la degradación dependientes de ubiquitina de componentes de distintas vías, HECTD1 puede influir en procesos como la progresión del ciclo celular, las respuestas al estrés y la dinámica del citoesqueleto, que dependen de una remodelación oportuna de las redes proteicas. La actividad desregulada de las ligasas E3 se asocia con frecuencia a una fidelidad de señalización alterada y a fenotipos celulares aberrantes, lo que convierte a HECTD1 en un nodo relevante para estudiar la función del sistema ubiquitina–proteasoma en células humanas. La investigación sobre HECTD1 respalda el análisis mecanístico de cómo la ubiquitinación se integra con programas de señalización importantes para el desarrollo y asociados a enfermedades.

El plásmido CRISPR/Cas9 KO HECTD1 (h) es un conjunto de plásmidos diseñado para la interrupción dirigida del gen HECTD1 en líneas celulares human. Cada plásmido coexpresa un ARN guía único (sgRNA) dirigido a un sitio distinto dentro del HECTD1 junto con la nucleasa Cas9 de Streptococcus pyogenes. Los plásmidos también codifican GFP, lo que permite la identificación fluorescente y el enriquecimiento de las células transfectadas con éxito mediante microscopía de fluorescencia o citometría de flujo.

El diseño multiguía aumenta la probabilidad de generar inserciones o deleciones (indeles) que interrumpan el marco de lectura abierto de HECTD1 tras la formación de roturas de doble cadena mediadas por Cas9. Las roturas de ADN introducidas por el sistema CRISPR/Cas9 se reparan a través de vías endógenas de unión de extremos no homólogos (NHEJ), lo que con frecuencia da lugar a mutaciones de desplazamiento del marco de lectura que anulan la expresión de la proteína HECTD1.

Este sistema de knockout CRISPR permite la generación eficiente de modelos celulares deficientes en HECTD1 para la investigación de la señalización de HECTD1, estudios de genómica funcional, investigación en biología del cáncer y evaluación de respuestas terapéuticas en líneas celulares humanas.

Características principales

• sgRNA dirigidos a los exones de HECTD1 críticos para la función de HECTD1
  Coexpresión de SpCas9 y sgRNA a partir de un único plásmido para simplificar la administración
  Reportero GFP para la identificación de células transfectadas
  Conjunto de plásmidos dirigidos a múltiples sitios genómicos de HECTD1 para mejorar la eficiencia del knockout
  Compatible con la administración mediante transfección

Variantes de diseño

CRISPRs +/- HDRs

• Los gRNA codificados por el plásmido HECTD1 CRISPR/Cas9 KO (h) y el plásmido HECTD1 CRISPR/Cas9 KO (h2) se dirigen a sitios distintos dentro del locus HECTD1. Puede estar disponible uno o ambos diseños de orientación. Consulte «Productos relacionados» para conocer la disponibilidad.
  Las construcciones donantes HDR codificadas por el plásmido HDR HECTD1 (h) y el plásmido HDR HECTD1 (h2) contienen un casete de resistencia a la puromicina y un reportero RFP flanqueado por brazos de homología HECTD1 para facilitar la reparación dirigida por homología en sitios diana HECTD1 definidos que se corresponden con los diseños de KO de CRISPR/Cas9. La disponibilidad de los donantes HDR puede variar. Consulte «Productos relacionados» para conocer la disponibilidad.

Sólo para uso en investigación. No destinado a uso diagnóstico o terapéutico.