Headpin CRISPR/Cas9 KO Plasmid (h): sc-409662

Übersicht

SERPINB13 kodiert den menschlichen Serinproteaseinhibitor Headpin, ein Serpin der Klasse B (intrazellulär), das vor allem in mehrschichtigen Epithelien stark exprimiert wird. Headpin reguliert die Proteolyse, indem es ausgewählte trypsinähnliche Proteasen hemmt, und trägt so zur Aufrechterhaltung der Integrität der epithelialen Barriere sowie der Protease–Antiprotease-Homöostase während Differenzierung und Gewebeumbau bei. Durch die Begrenzung aberranter Proteaseaktivität kann SERPINB13 inflammatorische Signalwege, das Zellüberleben und Stressantworten beeinflussen, die mit epithelialen Verletzungen einhergehen. Eine veränderte SERPINB13-Expression wurde in verschiedenen epithelialen Pathologien beschrieben, was es zu einem nützlichen Ziel macht, um Mechanismen zu untersuchen, die die Kontrolle von Proteasen mit der Keratinozytenbiologie und krankheitsrelevanten Phänotypen verknüpfen.

Das Headpin CRISPR/Cas9-KO-Plasmid (h) ist ein Pool von Plasmiden, die für die gezielte Disruption des SERPINB13-Gens in human-Zelllinien entwickelt wurden. Jedes Plasmid koexprimiert eine einzigartige Single-Guide-RNA (sgRNA), die auf eine bestimmte Stelle innerhalb des SERPINB13-Gens abzielt, zusammen mit der Streptococcus pyogenes Cas9-Nuklease. Die Plasmide kodieren zudem für GFP, was die fluoreszente Identifizierung und Anreicherung erfolgreich transfizierter Zellen mittels Fluoreszenzmikroskopie oder Durchflusszytometrie ermöglicht.

Das Multi-Guide-Design erhöht die Wahrscheinlichkeit, dass Insertionen oder Deletionen (Indels) entstehen, die den offenen Leserahmen von SERPINB13 nach der Cas9-vermittelten Bildung von Doppelstrangbrüchen unterbrechen. Durch das CRISPR/Cas9-System verursachte DNA-Brüche werden über endogene NHEJ-Wege (Non-Homologous End Joining) repariert, was häufig zu Frameshift-Mutationen führt, die die Headpin-Proteinexpression aufheben.

Dieses CRISPR-Knockout-System ermöglicht die effiziente Erzeugung von SERPINB13-defizienten Zellmodellen zur Untersuchung der Headpin-Signalübertragung, für funktionelle Genomstudien, in der Krebsbiologieforschung sowie zur Bewertung therapeutischer Reaktionen in menschlichen Zelllinien.

Hauptmerkmale

• sgRNAs, die auf SERPINB13-Exone abzielen, die für die Headpin-Funktion entscheidend sind
  Ko-Expression von SpCas9 und sgRNA aus einem einzigen Plasmid zur vereinfachten Verabreichung
  GFP-Reporter zur Identifizierung transfizierter Zellen
  Pool von Plasmiden, die auf mehrere SERPINB13-Genomstellen abzielen, um die Knockout-Effizienz zu verbessern
  Kompatibel mit der Verabreichung durch Transfektion

Designvarianten

CRISPRs +/- HDRs

• gRNAs, die vom Headpin CRISPR/Cas9-KO-Plasmid (h) und vom Headpin CRISPR/Cas9-KO-Plasmid (h2) kodiert werden, zielen auf unterschiedliche Stellen innerhalb des SERPINB13-Lokus ab. Es kann ein oder beide Targeting-Designs verfügbar sein. Siehe „Verwandte Produkte“ für Verfügbarkeit.
  HDR-Donorkonstrukte, kodiert durch das Headpin HDR-Plasmid (h) und Headpin HDR-Plasmid (h2) kodiert, enthalten eine Puromycin-Resistenzkassette und einen RFP-Reporter, flankiert von SERPINB13-Homologiearmen, um die homologe Reparatur an definierten SERPINB13-Zielstellen entsprechend den CRISPR/Cas9-KO-Designs zu unterstützen. Die Verfügbarkeit von HDR-Donoren kann variieren. Siehe „Verwandte Produkte“ für Verfügbarkeit.

Nur für Forschungszwecke. Nicht für diagnostische oder therapeutische Zwecke bestimmt.