HCII CRISPR/Cas9 KO Plasmid (m): sc-420808

Übersicht

Serpind1 kodiert Heparin-Kofaktor II (HCII), einen Serinprotease-Inhibitor, der Thrombin selektiv inaktiviert; seine Aktivität wird durch Glykosaminoglykane wie Dermatansulfat deutlich verstärkt. Durch die Begrenzung der Thrombin-Proteolyse moduliert HCII die Gerinnung und greift in thrombinvermittelte Signalwege ein, die die Thrombozytenaktivierung, vaskuläre Entzündung und den Umbau der extrazellulären Matrix beeinflussen. In Mausmodellen wird die Funktion von Serpind1 häufig im Kontext von Hämostase und vaskulärer Biologie untersucht, da eine veränderte Thrombin-Kontrolle thrombosebezogene Phänotypen und Entzündungsreaktionen beeinflussen kann. Eine Dysregulation des Gleichgewichts zwischen Serpin und Protease ist relevant für Modelle thromboinflammatorischer Krankheitsmechanismen und für Reaktionen auf Gefäßverletzungen.

Das HCII CRISPR/Cas9-KO-Plasmid (m) ist ein Pool von Plasmiden, die für die gezielte Disruption des Serpind1-Gens in mouse-Zelllinien entwickelt wurden. Jedes Plasmid koexprimiert eine einzigartige Single-Guide-RNA (sgRNA), die auf eine bestimmte Stelle innerhalb des Serpind1-Gens abzielt, zusammen mit der Streptococcus pyogenes Cas9-Nuklease. Die Plasmide kodieren zudem für GFP, was die fluoreszente Identifizierung und Anreicherung erfolgreich transfizierter Zellen mittels Fluoreszenzmikroskopie oder Durchflusszytometrie ermöglicht.

Das Multi-Guide-Design erhöht die Wahrscheinlichkeit, dass Insertionen oder Deletionen (Indels) entstehen, die den offenen Leserahmen von Serpind1 nach der Cas9-vermittelten Bildung von Doppelstrangbrüchen unterbrechen. Durch das CRISPR/Cas9-System verursachte DNA-Brüche werden über endogene NHEJ-Wege (Non-Homologous End Joining) repariert, was häufig zu Frameshift-Mutationen führt, die die HCII-Proteinexpression aufheben.

Dieses CRISPR-Knockout-System ermöglicht die effiziente Erzeugung von Serpind1-defizienten Zellmodellen zur Untersuchung der HCII-Signalübertragung, für funktionelle Genomstudien, in der Krebsbiologieforschung sowie zur Bewertung therapeutischer Reaktionen in menschlichen Zelllinien.

Hauptmerkmale

• sgRNAs, die auf Serpind1-Exone abzielen, die für die HCII-Funktion entscheidend sind
  Ko-Expression von SpCas9 und sgRNA aus einem einzigen Plasmid zur vereinfachten Verabreichung
  GFP-Reporter zur Identifizierung transfizierter Zellen
  Pool von Plasmiden, die auf mehrere Serpind1-Genomstellen abzielen, um die Knockout-Effizienz zu verbessern
  Kompatibel mit der Verabreichung durch Transfektion

Designvarianten

CRISPRs +/- HDRs

• gRNAs, die vom HCII CRISPR/Cas9-KO-Plasmid (m) und vom HCII CRISPR/Cas9-KO-Plasmid (m2) kodiert werden, zielen auf unterschiedliche Stellen innerhalb des Serpind1-Lokus ab. Es kann ein oder beide Targeting-Designs verfügbar sein. Siehe „Verwandte Produkte“ für Verfügbarkeit.
  HDR-Donorkonstrukte, kodiert durch das HCII HDR-Plasmid (m) und HCII HDR-Plasmid (m2) kodiert, enthalten eine Puromycin-Resistenzkassette und einen RFP-Reporter, flankiert von Serpind1-Homologiearmen, um die homologe Reparatur an definierten Serpind1-Zielstellen entsprechend den CRISPR/Cas9-KO-Designs zu unterstützen. Die Verfügbarkeit von HDR-Donoren kann variieren. Siehe „Verwandte Produkte“ für Verfügbarkeit.

Nur für Forschungszwecke. Nicht für diagnostische oder therapeutische Zwecke bestimmt.