Not CRISPR data: the image illustrates antibody quality for visualizing CRISPR experiment results.
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HB9 Double Nickase Plasmid (h): sc-402097-NIC
- Zielspezies: human
- 20 µg transfektionsfertige, aufgereinigte Plasmid DNA; geeignet für 20 Transfektionen
- Das HB9 Double Nickase Plasmid (h) wird als Plasmid-Paar geliefert. Die einzelnen Plasmide kodieren für eine D10A mutierte Cas9 Nuklease sowie für je eine unterschiedliche, zielspezifische 20nt guide RNA (gRNA) Sequenz. Dies erlaubt eine hohe Knockout-Effizienz bei gleichzeitig größerer Spezifität als das entsprechende CRISPR/Cas9 KO Plasmid
- gRNA Sequenzpaare liegen ca. 20 bp auseinander um ein spezifisches Cas9-vermitteltes "Double Nicking" der genomischen DNA zu erlauben und so im Resultat den Effekt eines Doppelstrangbruchs nachzuahmen.
- Ein Plasmid kodiert für ein Puromycin-Resistenzgen zur Selektion von stabilen Knockout-Zellen. Das andere Plasmid kodiert für ein GFP-Gen für den visuellen Nachweis der Transfektion
- HB9 Double-Nickase-Plasmid (h) und HB9 Double-Nickase-Plasmid (h2) kodieren unterschiedliche gepaarte gRNA-Designs, die auf MNX1 abzielen. Möglicherweise ist eines oder sind beide Designs verfügbar
- Nach der Transfektion kann die Effizienz des Gen-Knockouts per Western Blot oder histologisch mit folgendem Antikörper überprüft werden: HB9: sc-515769
Bestellinformation
| Produkt | Katalog # | EINHEIT | Preis | ANZAHL | Favoriten | |
HB9 Double Nickase Plasmid (h) | sc-402097-NIC | 20 µg | $410.00 | |||
HB9 Double Nickase Plasmid (h2) | sc-402097-NIC-2 | 20 µg | $410.00 |
MNX1 codiert den Homeobox-Transkriptionsfaktor HB9, einen sequenzspezifischen DNA-bindenden Regulator, der während der Entwicklung für die ventrale Musterbildung des Rückenmarks und die Differenzierung von Motoneuronen essenziell ist. HB9 ist in transkriptionelle Programme eingebunden, die nachgeschaltet auf Morphogensignale reagieren, und wirkt mit anderen Homeodomänen-Faktoren zusammen, um die Identität neuronaler Subtypen, Eigenschaften der Axonführung und die Reifung motorischer Schaltkreise festzulegen. In hämatopoetischen Zusammenhängen werden eine fehlregulierte MNX1-Expression sowie chromosomale Umlagerungen, die diesen Lokus betreffen, mit akuten Leukämien in Verbindung gebracht, was seine Bedeutung für abweichende Linienspezifizierung und transkriptionelle Kontrolle unterstreicht. Als Entwicklungsregulator wird MNX1 häufig in Modellen der Neurogenese, der Zellschicksalsbestimmung und der krankheitsassoziierten Fehlregulation der Transkription untersucht.
HB9 Das Double-Nickase-Plasmid (h) besteht aus einem aufeinander abgestimmten Plasmidpaar, das für die hochspezifische Bearbeitung des MNX1-Lokus in human-Zelllinien entwickelt wurde. Jedes Plasmid exprimiert eine Cas9-D10A-Nickase und eine spezifische sgRNA, die auf entgegengesetzte DNA-Stränge innerhalb von MNX1 abzielt. Wenn sie auf benachbarte Stellen auf entgegengesetzten DNA-Strängen gerichtet sind, erzeugen die beiden Nickasen versetzte Einzelstrang-Schnitte, die zusammen einen versetzten Doppelstrangbruch erzeugen, was eine koordinierte On-Target-Aktivität beider Guides erfordert. Der resultierende DNA-Bruch wird durch endogene zelluläre Reparaturwege behoben, meist durch nicht-homologe Endverknüpfung (NHEJ), was zu Insertionen oder Deletionen führt, die die MNX1-Funktion stören. Durch die Notwendigkeit einer doppelten sgRNA-Bindung am Zielort erhöht der Doppel-Nick-Ansatz die Spezifität der Bearbeitung und bietet eine komplementäre CRISPR-Strategie für Anwendungen, bei denen eine zusätzliche Kontrolle über die Zielgenauigkeit gewünscht ist.
Um eine effiziente Identifizierung editierter Zellen zu unterstützen, kodiert ein Plasmid GFP zur fluoreszierenden Visualisierung transfizierter Populationen, während das Begleitplasmid ein Puromycin-Resistenzgen für die Antibiotika-Selektion trägt. Zusammen unterstützen diese Merkmale eine effiziente Anreicherung co-transfizierter Populationen und vereinfachen die Validierung von Klonen mit MNX1-Störung.
Nur für Forschungszwecke. Nicht für diagnostische oder therapeutische Zwecke bestimmt.