Plásmido CRISPR de Activación (h) HB9: sc-402097-ACT

MNX1 codifica el factor de transcripción homeobox HB9, un regulador nuclear que controla programas de expresión génica del desarrollo. HB9 es conocido sobre todo por dirigir la especificación y diferenciación de las neuronas motoras en la médula espinal ventral y por contribuir a las decisiones de linaje pancreático, donde influye en redes transcripcionales que gobiernan el destino y la maduración celular. Mediante la unión al ADN dependiente de secuencia, HB9 se integra con procesos más amplios de señalización del desarrollo y de regulación de la cromatina para moldear patrones de expresión génica neuronales y endocrinos. La expresión desregulada de MNX1/HB9 se asocia con trastornos congénitos de las neuronas motoras y se ha descrito en contextos de tumores hematológicos y sólidos, lo que lo convierte en un nodo útil para estudiar la diferenciación aberrante y el control transcripcional.

HB9 El plásmido de activación CRISPR (h) proporciona un enfoque específico y no destructivo para regular al alza la expresión endógena de MNX1 sin alterar la secuencia de ADN subyacente.

HB9 El plásmido de activación CRISPR (h) es un sistema mediador de activación sinérgica (SAM) de tres plásmidos diseñado para la regulación al alza transcripcional altamente eficiente y específica del locus MNX1 en líneas celulares humanas. El sistema se basa en una Cas9 catalíticamente inactiva (dCas9) que porta dos mutaciones inactivadoras (D10A y N863A) que eliminan la actividad nucleasa al tiempo que conservan la unión al ADN. Esta dCas9 se fusiona con VP64, un potente activador transcripcional, y se coexpresa con un gen de resistencia a la blasticidina para la selección. El segundo plásmido codifica la proteína de fusión MS2-p65-HSF1, un complejo activador secundario que actúa en conjunto con dCas9-VP64, junto con un gen de resistencia a la higromicina. El tercer plásmido codifica un ARN guía (sgRNA) específico del objetivo de 20 nt fusionado a dos aptámeros de ARN MS2 que reclutan el complejo MS2-p65-HSF1 al sitio de activación, acompañado de un gen de resistencia a la puromicina. Los tres plásmidos se administran en una proporción de masa de 1:1:1 para una expresión equilibrada de todos los componentes del sistema.

Una vez ensamblado en el locus diana, el complejo SAM se une aproximadamente 200 pb aguas arriba del sitio de inicio transcripcional MNX1, donde VP64, p65 y HSF1 actúan de forma coordinada para reclutar la maquinaria transcripcional e impulsar la regulación al alza de la expresión endógena de HB9. A diferencia de la Cas9 con actividad nucleasa, dCas9 no introduce roturas de doble cadena ni modifica la secuencia genómica, preservando el locus nativo MNX1 y permitiendo el estudio de las respuestas transcripcionales dependientes de HB9 en el locus endógeno, lo que la convierte en una herramienta valiosa para estudios funcionales, la identificación de genes diana y la modelización de la restauración de la vía HB9 en células tumorales con expresión de MNX1 silenciada o reducida.

Sólo para uso en investigación. No destinado a uso diagnóstico o terapéutico.