Plasmide CRISPR/Cas9 KO HAUSP (m): sc-434244

Présentation

Chez la souris, Usp7 code HAUSP, une protéase spécifique de l’ubiquitine qui retire l’ubiquitine de régulateurs clés de l’intégrité du génome et de la transcription, notamment l’axe p53–MDM2, modulant ainsi la stabilité des protéines et la dynamique des voies de signalisation. HAUSP participe au contrôle de la voie ubiquitine–protéasome, à la réponse aux dommages de l’ADN, à la gestion du stress de réplication et à des processus associés à la chromatine qui influencent la progression du cycle cellulaire et l’apoptose. En déubiquitinant des facteurs impliqués dans la signalisation des points de contrôle et la réparation, Usp7 contribue à déterminer l’issue des réponses au stress génotoxique et à l’activation d’oncogènes. Une activité dérégulée de USP7/HAUSP a été associée, dans des modèles expérimentaux, à des altérations des réseaux de suppresseurs de tumeurs, à un déséquilibre de la signalisation immunitaire et inflammatoire, ainsi qu’à des phénotypes plus larges pertinents pour le cancer.

Le plasmide CRISPR/Cas9 KO HAUSP (m) est un ensemble de plasmides conçus pour la disruption ciblée du gène Usp7 dans les lignées cellulaires mouse. Chaque plasmide co-exprime un ARN guide unique (sgRNA) ciblant un site distinct au sein du Usp7, ainsi que la nucléase Cas9 de Streptococcus pyogenes. Les plasmides codent également pour la GFP, ce qui permet l'identification par fluorescence et l'enrichissement des cellules transfectées avec succès par microscopie à fluorescence ou cytométrie en flux.

La conception multi-guide augmente la probabilité de générer des insertions ou des délétions (indels) qui perturbent le cadre de lecture ouvert Usp7 à la suite de la formation de cassures double brin médiées par Cas9. Les cassures d'ADN introduites par le système CRISPR/Cas9 sont réparées par des voies endogènes de jonction non homologue (NHEJ), ce qui entraîne fréquemment des mutations par décalage du cadre de lecture qui suppriment l'expression de la protéine HAUSP.

Ce système de knock-out CRISPR permet la génération efficace de modèles cellulaires déficients en Usp7 pour l'étude de la signalisation de HAUSP, les études de génomique fonctionnelle, la recherche en biologie du cancer et l'évaluation des réponses thérapeutiques dans des lignées cellulaires humaines.

Caractéristiques principales

• sgRNA ciblant le ou les exons de Usp7 essentiels à la fonction de HAUSP
  Co-expression de SpCas9 et de sgRNA à partir d'un seul plasmide pour une administration simplifiée
  Rapporteur GFP pour l'identification des cellules transfectées
  Pool de plasmides ciblant plusieurs sites génomiques de Usp7 pour améliorer l'efficacité du knock-out
  Compatible avec l'administration par transfection

Variantes de conception

CRISPR +/- HDR

• Les gRNA codés par le HAUSP plasmide CRISPR/Cas9 KO (m) et le HAUSP plasmide CRISPR/Cas9 KO (m2) ciblent des sites distincts au sein du locus Usp7. Une ou les deux conceptions de ciblage peuvent être disponibles. Voir les produits associés pour connaître la disponibilité.
  Les constructions donneuses HDR codées par le HAUSP plasmide HDR (m) et le HAUSP (m2) contiennent une cassette de résistance à la puromycine et un rapporteur RFP flanqué de bras d'homologie Usp7 pour permettre la réparation dirigée par homologie au niveau de sites cibles Usp7 définis correspondant aux conceptions CRISPR/Cas9 KO. La disponibilité des donneurs HDR peut varier. Voir les produits associés pour connaître la disponibilité.

Réservé à la recherche. N'est pas destiné à un usage diagnostique ou thérapeutique.