Haptoglobin Double Nickase Plasmid (h): sc-401468-NIC
- Zielspezies: human
- 20 µg transfektionsfertige, aufgereinigte Plasmid DNA; geeignet für 20 Transfektionen
- Das Haptoglobin Double Nickase Plasmid (h) wird als Plasmid-Paar geliefert. Die einzelnen Plasmide kodieren für eine D10A mutierte Cas9 Nuklease sowie für je eine unterschiedliche, zielspezifische 20nt guide RNA (gRNA) Sequenz. Dies erlaubt eine hohe Knockout-Effizienz bei gleichzeitig größerer Spezifität als das entsprechende CRISPR/Cas9 KO Plasmid
- gRNA Sequenzpaare liegen ca. 20 bp auseinander um ein spezifisches Cas9-vermitteltes "Double Nicking" der genomischen DNA zu erlauben und so im Resultat den Effekt eines Doppelstrangbruchs nachzuahmen.
- Ein Plasmid kodiert für ein Puromycin-Resistenzgen zur Selektion von stabilen Knockout-Zellen. Das andere Plasmid kodiert für ein GFP-Gen für den visuellen Nachweis der Transfektion
- Haptoglobin Double-Nickase-Plasmid (h) und Haptoglobin Double-Nickase-Plasmid (h2) kodieren unterschiedliche gepaarte gRNA-Designs, die auf HP abzielen. Möglicherweise ist eines oder sind beide Designs verfügbar
- Nach der Transfektion kann die Effizienz des Gen-Knockouts per Western Blot oder histologisch mit folgendem Antikörper überprüft werden: Haptoglobin α: sc-376893
Bestellinformation
| Produkt | Katalog # | EINHEIT | Preis | ANZAHL | Favoriten | |
Haptoglobin Double Nickase Plasmid (h) | sc-401468-NIC | 20 µg | $410.00 | |||
Haptoglobin Double Nickase Plasmid (h2) | sc-401468-NIC-2 | 20 µg | $410.00 |
HP kodiert Haptoglobin, ein sekretiertes Akut‑Phase‑Glykoprotein, das freies Hämoglobin mit hoher Affinität bindet, um hämgetriebene oxidative Schäden zu begrenzen und die Bioverfügbarkeit von vaskulärem Stickstoffmonoxid zu erhalten. Der Haptoglobin‑Hämoglobin‑Komplex wird überwiegend über CD163‑exprimierende Makrophagen entfernt und verknüpft HP damit mit der Häm‑Elimination, dem Eisenstoffwechsel sowie Programmen der angeborenen Immunantwort zur Auflösung von Gewebeschädigung und Entzündung. Über diese Prozesse steht HP an der Schnittstelle von Kontrolle des oxidativen Stresses, Makrophagenpolarisierung und komplementassoziierter inflammatorischer Signalgebung. Eine veränderte HP‑Expression oder ein bestimmter Genotyp wurde in Kontexten von Hämolyse und chronischer Entzündung untersucht, unter anderem bei kardiometabolischen und vaskulären Erkrankungen, in denen oxidative Belastung und Immunaktivierung zentrale experimentelle Variablen sind.
Haptoglobin Das Double-Nickase-Plasmid (h) besteht aus einem aufeinander abgestimmten Plasmidpaar, das für die hochspezifische Bearbeitung des HP-Lokus in human-Zelllinien entwickelt wurde. Jedes Plasmid exprimiert eine Cas9-D10A-Nickase und eine spezifische sgRNA, die auf entgegengesetzte DNA-Stränge innerhalb von HP abzielt. Wenn sie auf benachbarte Stellen auf entgegengesetzten DNA-Strängen gerichtet sind, erzeugen die beiden Nickasen versetzte Einzelstrang-Schnitte, die zusammen einen versetzten Doppelstrangbruch erzeugen, was eine koordinierte On-Target-Aktivität beider Guides erfordert. Der resultierende DNA-Bruch wird durch endogene zelluläre Reparaturwege behoben, meist durch nicht-homologe Endverknüpfung (NHEJ), was zu Insertionen oder Deletionen führt, die die HP-Funktion stören. Durch die Notwendigkeit einer doppelten sgRNA-Bindung am Zielort erhöht der Doppel-Nick-Ansatz die Spezifität der Bearbeitung und bietet eine komplementäre CRISPR-Strategie für Anwendungen, bei denen eine zusätzliche Kontrolle über die Zielgenauigkeit gewünscht ist.
Um eine effiziente Identifizierung editierter Zellen zu unterstützen, kodiert ein Plasmid GFP zur fluoreszierenden Visualisierung transfizierter Populationen, während das Begleitplasmid ein Puromycin-Resistenzgen für die Antibiotika-Selektion trägt. Zusammen unterstützen diese Merkmale eine effiziente Anreicherung co-transfizierter Populationen und vereinfachen die Validierung von Klonen mit HP-Störung.
Nur für Forschungszwecke. Nicht für diagnostische oder therapeutische Zwecke bestimmt.