hamartin CRISPR/Cas9 KO Plasmid (h): sc-402444

Übersicht

TSC1 kodiert Hamartin, ein Gerüstprotein, das mit TSC2 (Tuberin) einen funktionellen Komplex bildet, um die mTORC1-Signalgebung zu dämpfen, indem es die kleine GTPase Rheb reguliert. Über diese Tumorsuppressor-Achse integriert Hamartin Signale aus PI3K–AKT, AMPK und zellulären Stressreizen, um Proteinsynthese, Autophagie, Stoffwechsel und Zellwachstum zu koordinieren. Verlust oder Funktionsstörung von TSC1 stört die mTOR-abhängige Homöostase, verändert lysosomale und zytoskelettale Dynamiken und beeinträchtigt die neuronale und gliale Entwicklung. Diese Signalwege stehen im Zentrum der in der Biologie des tuberösen Sklerose-Komplexes untersuchten Mechanismen sowie breiterer, mTOR-getriebener Phänotypen von Zellwachstum und Differenzierung.

Das hamartin CRISPR/Cas9-KO-Plasmid (h) ist ein Pool von Plasmiden, die für die gezielte Disruption des TSC1-Gens in human-Zelllinien entwickelt wurden. Jedes Plasmid koexprimiert eine einzigartige Single-Guide-RNA (sgRNA), die auf eine bestimmte Stelle innerhalb des TSC1-Gens abzielt, zusammen mit der Streptococcus pyogenes Cas9-Nuklease. Die Plasmide kodieren zudem für GFP, was die fluoreszente Identifizierung und Anreicherung erfolgreich transfizierter Zellen mittels Fluoreszenzmikroskopie oder Durchflusszytometrie ermöglicht.

Das Multi-Guide-Design erhöht die Wahrscheinlichkeit, dass Insertionen oder Deletionen (Indels) entstehen, die den offenen Leserahmen von TSC1 nach der Cas9-vermittelten Bildung von Doppelstrangbrüchen unterbrechen. Durch das CRISPR/Cas9-System verursachte DNA-Brüche werden über endogene NHEJ-Wege (Non-Homologous End Joining) repariert, was häufig zu Frameshift-Mutationen führt, die die hamartin-Proteinexpression aufheben.

Dieses CRISPR-Knockout-System ermöglicht die effiziente Erzeugung von TSC1-defizienten Zellmodellen zur Untersuchung der hamartin-Signalübertragung, für funktionelle Genomstudien, in der Krebsbiologieforschung sowie zur Bewertung therapeutischer Reaktionen in menschlichen Zelllinien.

Hauptmerkmale

• sgRNAs, die auf TSC1-Exone abzielen, die für die hamartin-Funktion entscheidend sind
  Ko-Expression von SpCas9 und sgRNA aus einem einzigen Plasmid zur vereinfachten Verabreichung
  GFP-Reporter zur Identifizierung transfizierter Zellen
  Pool von Plasmiden, die auf mehrere TSC1-Genomstellen abzielen, um die Knockout-Effizienz zu verbessern
  Kompatibel mit der Verabreichung durch Transfektion

Designvarianten

CRISPRs +/- HDRs

• gRNAs, die vom hamartin CRISPR/Cas9-KO-Plasmid (h) und vom hamartin CRISPR/Cas9-KO-Plasmid (h2) kodiert werden, zielen auf unterschiedliche Stellen innerhalb des TSC1-Lokus ab. Es kann ein oder beide Targeting-Designs verfügbar sein. Siehe „Verwandte Produkte“ für Verfügbarkeit.
  HDR-Donorkonstrukte, kodiert durch das hamartin HDR-Plasmid (h) und hamartin HDR-Plasmid (h2) kodiert, enthalten eine Puromycin-Resistenzkassette und einen RFP-Reporter, flankiert von TSC1-Homologiearmen, um die homologe Reparatur an definierten TSC1-Zielstellen entsprechend den CRISPR/Cas9-KO-Designs zu unterstützen. Die Verfügbarkeit von HDR-Donoren kann variieren. Siehe „Verwandte Produkte“ für Verfügbarkeit.

Nur für Forschungszwecke. Nicht für diagnostische oder therapeutische Zwecke bestimmt.