HAI-2 CRISPR/Cas9 KO Plasmid (m): sc-423129

Übersicht

Spint2 kodiert den Serinprotease-Inhibitor HAI-2, einen membranassoziierten Regulator vom Kunitz-Typ, der die perizelluläre Proteolyse begrenzt, indem er Serinproteasen vom Typ II mit Transmembrandomäne wie Matriptase und Hepsin hemmt. Durch die Einschränkung der proteasegetriebenen Aktivierung von Wachstumsfaktoren und die Modulation des Umsatzes der extrazellulären Matrix beeinflusst HAI-2 die Integrität epithelialer Barrieren, die Gewebeumgestaltung sowie Programme der Zellpolarität. In Mausmodellen wird eine veränderte SPINT2/HAI-2-Aktivität genutzt, um ein dysreguliertes Protease‑Inhibitor‑Gleichgewicht zu untersuchen, das mit epithelialer Dysfunktion und aberranter stromal‑epithelialer Signalübertragung verbunden ist. Diese Prozesse überschneiden sich mit Signalwegen, die Adhäsion, Migration und proteaseabhängige Signalkaskaden steuern und für die Modellierung von Entzündung und Tumorbiologie relevant sind.

Das HAI-2 CRISPR/Cas9-KO-Plasmid (m) ist ein Pool von Plasmiden, die für die gezielte Disruption des Spint2-Gens in mouse-Zelllinien entwickelt wurden. Jedes Plasmid koexprimiert eine einzigartige Single-Guide-RNA (sgRNA), die auf eine bestimmte Stelle innerhalb des Spint2-Gens abzielt, zusammen mit der Streptococcus pyogenes Cas9-Nuklease. Die Plasmide kodieren zudem für GFP, was die fluoreszente Identifizierung und Anreicherung erfolgreich transfizierter Zellen mittels Fluoreszenzmikroskopie oder Durchflusszytometrie ermöglicht.

Das Multi-Guide-Design erhöht die Wahrscheinlichkeit, dass Insertionen oder Deletionen (Indels) entstehen, die den offenen Leserahmen von Spint2 nach der Cas9-vermittelten Bildung von Doppelstrangbrüchen unterbrechen. Durch das CRISPR/Cas9-System verursachte DNA-Brüche werden über endogene NHEJ-Wege (Non-Homologous End Joining) repariert, was häufig zu Frameshift-Mutationen führt, die die HAI-2-Proteinexpression aufheben.

Dieses CRISPR-Knockout-System ermöglicht die effiziente Erzeugung von Spint2-defizienten Zellmodellen zur Untersuchung der HAI-2-Signalübertragung, für funktionelle Genomstudien, in der Krebsbiologieforschung sowie zur Bewertung therapeutischer Reaktionen in menschlichen Zelllinien.

Hauptmerkmale

• sgRNAs, die auf Spint2-Exone abzielen, die für die HAI-2-Funktion entscheidend sind
  Ko-Expression von SpCas9 und sgRNA aus einem einzigen Plasmid zur vereinfachten Verabreichung
  GFP-Reporter zur Identifizierung transfizierter Zellen
  Pool von Plasmiden, die auf mehrere Spint2-Genomstellen abzielen, um die Knockout-Effizienz zu verbessern
  Kompatibel mit der Verabreichung durch Transfektion

Designvarianten

CRISPRs +/- HDRs

• gRNAs, die vom HAI-2 CRISPR/Cas9-KO-Plasmid (m) und vom HAI-2 CRISPR/Cas9-KO-Plasmid (m2) kodiert werden, zielen auf unterschiedliche Stellen innerhalb des Spint2-Lokus ab. Es kann ein oder beide Targeting-Designs verfügbar sein. Siehe „Verwandte Produkte“ für Verfügbarkeit.
  HDR-Donorkonstrukte, kodiert durch das HAI-2 HDR-Plasmid (m) und HAI-2 HDR-Plasmid (m2) kodiert, enthalten eine Puromycin-Resistenzkassette und einen RFP-Reporter, flankiert von Spint2-Homologiearmen, um die homologe Reparatur an definierten Spint2-Zielstellen entsprechend den CRISPR/Cas9-KO-Designs zu unterstützen. Die Verfügbarkeit von HDR-Donoren kann variieren. Siehe „Verwandte Produkte“ für Verfügbarkeit.

Nur für Forschungszwecke. Nicht für diagnostische oder therapeutische Zwecke bestimmt.