G_{α 12} CRISPR Activation Plasmid (h): sc-401264-ACT

GNA12 kodiert die heterotrimere G‑Protein‑α‑Untereinheit Gα12, einen zentralen Signalüberträger für GPCR‑Signale, die an Signalwege der G12/13‑Klasse koppeln. Nach Aktivierung rekrutiert Gα12 Rho‑Guanin‑Nukleotid‑Austauschfaktoren und stimuliert dadurch die RhoA‑Signalgebung, was die Dynamik des Aktinzytoskeletts sowie Zelladhäsion, Migration und Kontraktilität prägt. Diese Signalachse überschneidet sich mit MAPK‑ und anderen stressresponsiven Netzwerken und beeinflusst Transkriptionsprogramme, die mit Wachstums- und Entzündungssignalen verknüpft sind. Eine fehlregulierte GNA12/Gα12‑Aktivität wurde in mehreren Krebsmodellen mit abweichender Motilität und invasiven Phänotypen in Verbindung gebracht und ist daher für mechanistische Studien zu metastaseassoziierter Signalgebung relevant.

Gα 12 Das CRISPR-Aktivierungsplasmid (h) bietet einen gezielten, nicht-destruktiven Ansatz zur Hochregulierung der endogenen GNA12-Expression, ohne die zugrunde liegende DNA-Sequenz zu verändern.

Gα 12 Das CRISPR-Aktivierungsplasmid (h) ist ein aus drei Plasmiden bestehendes synergistisches Aktivierungsmediator-System (SAM), das für eine hocheffiziente, ortsspezifische transkriptionelle Hochregulation des GNA12-Lokus in menschlichen Zelllinien entwickelt wurde. Das System basiert auf einem katalytisch inaktiven Cas9 (dCas9), das zwei inaktivierende Mutationen (D10A und N863A) trägt, welche die Nukleaseaktivität eliminieren, während die DNA-Bindung erhalten bleibt. Dieses dCas9 ist mit VP64, einem potenten Transkriptionsaktivator, fusioniert und wird zusammen mit einem Blasticidin-Resistenzgen zur Selektion koexprimiert. Das zweite Plasmid kodiert das MS2-p65-HSF1-Fusionsprotein, einen sekundären Aktivatorkomplex, der zusammen mit dCas9-VP64 wirkt, sowie ein Hygromycin-Resistenzgen. Das dritte Plasmid kodiert für eine zielspezifische 20-nt-sgRNA, die an zwei MS2-RNA-Aptamere fusioniert ist, welche den MS2-p65-HSF1-Komplex an die Aktivierungsstelle rekrutieren, begleitet von einem Puromycin-Resistenzgen. Die drei Plasmide werden im Massenverhältnis 1:1:1 verabreicht, um eine ausgewogene Expression aller Systemkomponenten zu gewährleisten.

Nach der Assemblierung am Zielort bindet der SAM-Komplex etwa 200 bp stromaufwärts der GNA12-Transkriptionsstartstelle, wo VP64, p65 und HSF1 gemeinsam die Transkriptionsmaschinerie rekrutieren und die Hochregulation der endogenen Gα 12-Expression vorantreiben. Im Gegensatz zu nukleaseaktivem Cas9 verursacht dCas9 keine Doppelstrangbrüche und verändert die genomische Sequenz nicht, wodurch der native GNA12-Locus erhalten bleibt und die Untersuchung von Gα 12-abhängigen Transkriptionsreaktionen am endogenen Locus ermöglicht wird. Dies macht es zu einem wertvollen Werkzeug für Funktionsstudien, die Identifizierung von Zielgenen und die Modellierung der Wiederherstellung des Gα 12-Signalwegs in Tumorzellen mit stillgelegtem oder reduziertem GNA12-Ausdruck.

Nur für Forschungszwecke. Nicht für diagnostische oder therapeutische Zwecke bestimmt.