Plasmide CRISPR/Cas9 KO GSTT1 (m): sc-420721

Présentation

Le gène murin *Gstt1* code la glutathion S‑transférase thêta 1 (GSTT1), une enzyme de détoxification de phase II qui catalyse la conjugaison du glutathion à divers xénobiotiques électrophiles et à des métabolites endogènes réactifs. GSTT1 contribue à l’homéostasie rédox et à la défense cellulaire contre le stress oxydatif en facilitant l’élimination des produits de peroxydation lipidique et d’autres intermédiaires réactifs. Son activité interfère avec le métabolisme du glutathion, les voies de réponse à la carcinogenèse chimique et, plus largement, les réseaux de signalisation liés aux électrophiles/ROS qui influencent l’adaptation cellulaire au stress. Les variations de fonction de la famille GSTT sont fréquemment étudiées dans le contexte de la sensibilité aux toxiques, des lésions tissulaires associées à l’inflammation et des modèles de biologie tumorale, où la capacité de détoxification peut moduler les phénotypes.

Le plasmide CRISPR/Cas9 KO GSTT1 (m) est un ensemble de plasmides conçus pour la disruption ciblée du gène Gstt1 dans les lignées cellulaires mouse. Chaque plasmide co-exprime un ARN guide unique (sgRNA) ciblant un site distinct au sein du Gstt1, ainsi que la nucléase Cas9 de Streptococcus pyogenes. Les plasmides codent également pour la GFP, ce qui permet l'identification par fluorescence et l'enrichissement des cellules transfectées avec succès par microscopie à fluorescence ou cytométrie en flux.

La conception multi-guide augmente la probabilité de générer des insertions ou des délétions (indels) qui perturbent le cadre de lecture ouvert Gstt1 à la suite de la formation de cassures double brin médiées par Cas9. Les cassures d'ADN introduites par le système CRISPR/Cas9 sont réparées par des voies endogènes de jonction non homologue (NHEJ), ce qui entraîne fréquemment des mutations par décalage du cadre de lecture qui suppriment l'expression de la protéine GSTT1.

Ce système de knock-out CRISPR permet la génération efficace de modèles cellulaires déficients en Gstt1 pour l'étude de la signalisation de GSTT1, les études de génomique fonctionnelle, la recherche en biologie du cancer et l'évaluation des réponses thérapeutiques dans des lignées cellulaires humaines.

Caractéristiques principales

• sgRNA ciblant le ou les exons de Gstt1 essentiels à la fonction de GSTT1
  Co-expression de SpCas9 et de sgRNA à partir d'un seul plasmide pour une administration simplifiée
  Rapporteur GFP pour l'identification des cellules transfectées
  Pool de plasmides ciblant plusieurs sites génomiques de Gstt1 pour améliorer l'efficacité du knock-out
  Compatible avec l'administration par transfection

Variantes de conception

CRISPR +/- HDR

• Les gRNA codés par le GSTT1 plasmide CRISPR/Cas9 KO (m) et le GSTT1 plasmide CRISPR/Cas9 KO (m2) ciblent des sites distincts au sein du locus Gstt1. Une ou les deux conceptions de ciblage peuvent être disponibles. Voir les produits associés pour connaître la disponibilité.
  Les constructions donneuses HDR codées par le GSTT1 plasmide HDR (m) et le GSTT1 (m2) contiennent une cassette de résistance à la puromycine et un rapporteur RFP flanqué de bras d'homologie Gstt1 pour permettre la réparation dirigée par homologie au niveau de sites cibles Gstt1 définis correspondant aux conceptions CRISPR/Cas9 KO. La disponibilité des donneurs HDR peut varier. Voir les produits associés pour connaître la disponibilité.

Réservé à la recherche. N'est pas destiné à un usage diagnostique ou thérapeutique.