Plasmide Double Nickase (h) GS1: sc-405996-NIC
- Espèces cibles: human
- 20 µg d'ADN plasmidique purifié et prêt à transfecter; Jusqu'à 20 transfections
- Le Plasmide Double Nickase (h) GS1 correspond à une paire de plasmides chacun codant la nucléase Cas9 mutante D10A et un ARN guide (gARN) cible de 20 nt specifique, élaboré pour le knockout optimal de l'expression d'un gène avec une plus grande spécificité que le plasmide KO CRISPR/Cas9 correspondant.
- Les séquences des paires d'ARNg sont décalées de 20 pb environ pour induire avec la Cas9 une double entaille spécifique de l'ADN génomique, qui imite un DSB
- L'un des plasmides de la paire contient un gène de résistance à la puromycine; l'autre plasmide de la paire contient un marqueur GFP pour confirmer visuellement la transfection
- Le plasmide GS1 Double Nickase (h) et le plasmide GS1 Double Nickase (h2) codent pour des paires distinctes de gRNA ciblant PUDP. Un ou les deux modèles peuvent être disponibles
- Après transfection, l'efficacité de knockout de gène peut être évaluée par WB, IF ou IHC en utilisant l'anticorps: GS1 Antibody (B-4): sc-166043
Informations pour la commande
| Nom du produit | Ref. Catalogue | COND. | Prix HT | QTÉ | Favoris | |
Plasmide Double Nickase (h) GS1 | sc-405996-NIC | 20 µg | $410.00 | |||
Plasmide Double Nickase (h2) GS1 | sc-405996-NIC-2 | 20 µg | $410.00 |
Le gène humain **PUDP** code la pseudouridine-5′-phosphatase (**GS1**), une enzyme du réseau de sauvetage des nucléosides pyrimidiques qui déphosphoryle le monophosphate de pseudouridine en pseudouridine, contribuant à l’homéostasie des nucléotides et au renouvellement de l’ARN. Cette activité relie le catabolisme des modifications de l’ARN au métabolisme central du carbone en orientant le ribose-1-phosphate et des intermédiaires apparentés vers des voies métaboliques plus larges. Une altération de la fonction de PUDP/GS1 peut perturber l’équilibre cellulaire des nucléotides et l’état métabolique, des processus fréquemment associés au stress prolifératif et aux programmes de maintenance du génome. Par conséquent, PUDP présente un intérêt pour des études mécanistiques du métabolisme des modifications de l’ARN, de l’adaptation au stress et du remodelage des voies dans des modèles cellulaires pertinents pour les maladies.
GS1 Le plasmide double nickase (h) se compose d'une paire de plasmides appariés, conçus pour une édition hautement spécifique du locus PUDP dans les lignées cellulaires human. Chaque plasmide exprime une nickase Cas9 D10A et un sgRNA distinct ciblant des brins d'ADN opposés au sein de PUDP. Lorsqu'elles sont dirigées vers des sites adjacents sur des brins d'ADN opposés, les deux nickases génèrent des cassures simple brin décalées qui, ensemble, produisent une cassure double brin décalée, nécessitant une activité coordonnée sur la cible de la part des deux guides. La cassure d'ADN qui en résulte est résolue par les voies de réparation cellulaires endogènes, le plus souvent par jonction non homologue (NHEJ), ce qui conduit à des insertions ou des délétions qui perturbent la fonction de PUDP. En nécessitant l'engagement de deux ARNsg au locus cible, l'approche par double nick améliore la spécificité de l'édition et offre une stratégie CRISPR complémentaire pour les applications où un contrôle supplémentaire de la précision du ciblage est souhaité.
Afin de faciliter l'identification efficace des cellules éditées, un plasmide code pour la GFP permettant la visualisation par fluorescence des populations transfectées, tandis que le plasmide compagnon porte un gène de résistance à la puromycine pour la sélection antibiotique. Ensemble, ces caractéristiques favorisent l'enrichissement efficace des populations co-transfectées et simplifient la validation des clones présentant une perturbation de PUDP.
Réservé à la recherche. N'est pas destiné à un usage diagnostique ou thérapeutique.