Plásmido CRISPR de Activación (m) GRP: sc-432553-ACT

El gen **Grp** de ratón codifica el **péptido liberador de gastrina (GRP)**, un neuropéptido que señala principalmente a través del **receptor de GRP (GRPR)** para regular el flujo intracelular de calcio, la señalización **MAPK/ERK** y vías asociadas a **cAMP**. El GRP contribuye a la comunicación neuroendocrina y modula procesos como la actividad secretora gastrointestinal, la contractilidad del músculo liso y comportamientos del sistema nervioso central, como la alimentación y las respuestas al estrés. En tejidos periféricos y tumores, la señalización **GRP–GRPR** se ha asociado con programas mitogénicos e inflamatorios que interactúan con redes de señalización de factores de crecimiento. Por ello, la señalización desregulada de GRP se estudia con frecuencia en modelos de regulación neuroendocrina, fisiología gastrointestinal y activación de vías oncogénicas.

GRP El plásmido de activación CRISPR (m) proporciona un enfoque específico y no destructivo para regular al alza la expresión endógena de Grp sin alterar la secuencia de ADN subyacente.

GRP El plásmido de activación CRISPR (m) es un sistema mediador de activación sinérgica (SAM) de tres plásmidos diseñado para la regulación al alza transcripcional altamente eficiente y específica del locus Grp en líneas celulares humanas. El sistema se basa en una Cas9 catalíticamente inactiva (dCas9) que porta dos mutaciones inactivadoras (D10A y N863A) que eliminan la actividad nucleasa al tiempo que conservan la unión al ADN. Esta dCas9 se fusiona con VP64, un potente activador transcripcional, y se coexpresa con un gen de resistencia a la blasticidina para la selección. El segundo plásmido codifica la proteína de fusión MS2-p65-HSF1, un complejo activador secundario que actúa en conjunto con dCas9-VP64, junto con un gen de resistencia a la higromicina. El tercer plásmido codifica un ARN guía (sgRNA) específico del objetivo de 20 nt fusionado a dos aptámeros de ARN MS2 que reclutan el complejo MS2-p65-HSF1 al sitio de activación, acompañado de un gen de resistencia a la puromicina. Los tres plásmidos se administran en una proporción de masa de 1:1:1 para una expresión equilibrada de todos los componentes del sistema.

Una vez ensamblado en el locus diana, el complejo SAM se une aproximadamente 200 pb aguas arriba del sitio de inicio transcripcional Grp, donde VP64, p65 y HSF1 actúan de forma coordinada para reclutar la maquinaria transcripcional e impulsar la regulación al alza de la expresión endógena de GRP. A diferencia de la Cas9 con actividad nucleasa, dCas9 no introduce roturas de doble cadena ni modifica la secuencia genómica, preservando el locus nativo Grp y permitiendo el estudio de las respuestas transcripcionales dependientes de GRP en el locus endógeno, lo que la convierte en una herramienta valiosa para estudios funcionales, la identificación de genes diana y la modelización de la restauración de la vía GRP en células tumorales con expresión de Grp silenciada o reducida.

Sólo para uso en investigación. No destinado a uso diagnóstico o terapéutico.