Plasmide Double Nickase (h) group IVE sPLA2: sc-417296-NIC
- Espèces cibles: human
- 20 µg d'ADN plasmidique purifié et prêt à transfecter; Jusqu'à 20 transfections
- Le Plasmide Double Nickase (h) group IVE sPLA2 correspond à une paire de plasmides chacun codant la nucléase Cas9 mutante D10A et un ARN guide (gARN) cible de 20 nt specifique, élaboré pour le knockout optimal de l'expression d'un gène avec une plus grande spécificité que le plasmide KO CRISPR/Cas9 correspondant.
- Les séquences des paires d'ARNg sont décalées de 20 pb environ pour induire avec la Cas9 une double entaille spécifique de l'ADN génomique, qui imite un DSB
- L'un des plasmides de la paire contient un gène de résistance à la puromycine; l'autre plasmide de la paire contient un marqueur GFP pour confirmer visuellement la transfection
- Le plasmide group IVE sPLA2 Double Nickase (h) et le plasmide group IVE sPLA2 Double Nickase (h2) codent pour des paires distinctes de gRNA ciblant PLA2G4E. Un ou les deux modèles peuvent être disponibles
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| Nom du produit | Ref. Catalogue | COND. | Prix HT | QTÉ | Favoris | |
Plasmide Double Nickase (h) group IVE sPLA2 | sc-417296-NIC | 20 µg | $410.00 |
PLA2G4E code la phospholipase A2 sécrétoire du groupe IVE (sPLA2), une enzyme qui hydrolyse les glycérophospholipides membranaires afin de produire des acides gras libres et des lysophospholipides, lesquels agissent comme seconds messagers lipidiques. En régulant la disponibilité de l’acide arachidonique, PLA2G4E influence la biosynthèse des eicosanoïdes et se situe au carrefour de la signalisation inflammatoire, du remodelage membranaire et du métabolisme lipidique sensible au stress. Une activité phospholipasique altérée et le déséquilibre des médiateurs lipidiques en aval ont été associés à des physiopathologies liées à l’inflammation ainsi qu’à des réseaux de signalisation associés aux tumeurs, faisant de PLA2G4E une cible utile pour des études mécanistiques en immunologie et en biologie du cancer. Ses rôles dans la modulation de la composition lipidique locale soutiennent également des recherches sur le trafic vésiculaire, la fonction barrière et les transitions d’état cellulaire.
group IVE sPLA2 Le plasmide double nickase (h) se compose d'une paire de plasmides appariés, conçus pour une édition hautement spécifique du locus PLA2G4E dans les lignées cellulaires human. Chaque plasmide exprime une nickase Cas9 D10A et un sgRNA distinct ciblant des brins d'ADN opposés au sein de PLA2G4E. Lorsqu'elles sont dirigées vers des sites adjacents sur des brins d'ADN opposés, les deux nickases génèrent des cassures simple brin décalées qui, ensemble, produisent une cassure double brin décalée, nécessitant une activité coordonnée sur la cible de la part des deux guides. La cassure d'ADN qui en résulte est résolue par les voies de réparation cellulaires endogènes, le plus souvent par jonction non homologue (NHEJ), ce qui conduit à des insertions ou des délétions qui perturbent la fonction de PLA2G4E. En nécessitant l'engagement de deux ARNsg au locus cible, l'approche par double nick améliore la spécificité de l'édition et offre une stratégie CRISPR complémentaire pour les applications où un contrôle supplémentaire de la précision du ciblage est souhaité.
Afin de faciliter l'identification efficace des cellules éditées, un plasmide code pour la GFP permettant la visualisation par fluorescence des populations transfectées, tandis que le plasmide compagnon porte un gène de résistance à la puromycine pour la sélection antibiotique. Ensemble, ces caractéristiques favorisent l'enrichissement efficace des populations co-transfectées et simplifient la validation des clones présentant une perturbation de PLA2G4E.
Réservé à la recherche. N'est pas destiné à un usage diagnostique ou thérapeutique.