Plasmide CRISPR d'Activation (h) group IIF sPLA₂: sc-410098-ACT

PLA2G2F code la phospholipase A2 sécrétée de groupe IIF (sPLA2), une enzyme extracellulaire qui hydrolyse les phospholipides membranaires afin de libérer des acides gras libres et des lysophospholipides, modulant ainsi les réservoirs locaux de médiateurs lipidiques. En régulant la disponibilité de l’acide arachidonique, la sPLA2 de groupe IIF influence la biosynthèse des eicosanoïdes et les voies de signalisation inflammatoires en aval, notamment les réseaux des prostaglandines et des leucotriènes. L’expression de PLA2G2F est liée à la biologie épithéliale et aux fonctions associées à la barrière, où le remodelage lipidique contribue à la différenciation, aux réponses au stress et aux programmes induits par les cytokines. Une activité sPLA2 dérégulée et un déséquilibre des médiateurs lipidiques ont été associés à des affections cutanées inflammatoires et à des pathologies immuno-médiées plus larges, ce qui étaye sa pertinence dans les études mécanistiques de l’inflammation et de l’homéostasie tissulaire.

group IIF sPLA2 Le plasmide d'activation CRISPR (h) offre une approche ciblée et non destructive pour réguler à la hausse l'expression endogène de PLA2G2F sans modifier la séquence d'ADN sous-jacente.

group IIF sPLA2 Le plasmide d'activation CRISPR (h) est un système SAM (synergistic activation mediator) à trois plasmides conçu pour une régulation à la hausse hautement efficace et spécifique du locus PLA2G2F dans des lignées cellulaires humaines. Le système s'articule autour d'une Cas9 catalytiquement inactive (dCas9) portant deux mutations inactivantes (D10A et N863A) qui éliminent l'activité nucléase tout en préservant la liaison à l'ADN. Cette dCas9 est fusionnée à VP64, un puissant activateur transcriptionnel, et est co-exprimée avec un gène de résistance à la blasticidine pour la sélection. Le deuxième plasmide code pour la protéine de fusion MS2-p65-HSF1, un complexe activateur secondaire qui agit de concert avec dCas9-VP64, ainsi qu'un gène de résistance à l'hygromycine. Le troisième plasmide code pour un ARN guide (sgRNA) de 20 nt spécifique de la cible, fusionné à deux aptamères d'ARN MS2 qui recrutent le complexe MS2-p65-HSF1 vers le site d'activation, accompagné d'un gène de résistance à la puromycine. Les trois plasmides sont délivrés dans un rapport massique de 1:1:1 pour une expression équilibrée de tous les composants du système.

Une fois assemblé au locus cible, le complexe SAM se lie à environ 200 pb en amont du site de départ de la transcription PLA2G2F, où VP64, p65 et HSF1 agissent de concert pour recruter la machinerie transcriptionnelle et induire une régulation à la hausse de l'expression endogène de group IIF sPLA2. Contrairement à Cas9, qui possède une activité nucléase, dCas9 n'introduit pas de cassures double brin ni ne modifie la séquence génomique, préservant ainsi le locus PLA2G2F natif et permettant l'étude des réponses transcriptionnelles dépendantes de group IIF sPLA2 au niveau du locus endogène, ce qui en fait un outil précieux pour les études fonctionnelles, l'identification de gènes cibles et la modélisation de la restauration de la voie group IIF sPLA2 dans les cellules tumorales présentant une expression de PLA2G2F silencée ou réduite.

Réservé à la recherche. N'est pas destiné à un usage diagnostique ou thérapeutique.