GPS2 Plasmide KO CRISPR/Cas9 (h): sc-406290

Panoramica

Il soppressore 2 della via delle proteine G (GPS2) è una proteina adattatrice multifunzionale che regola la trascrizione dipendente dal segnale e integra segnali di stress, infiammazione e metabolismo. È nota soprattutto come componente del complesso corepressore dei recettori nucleari (NCoR)/SMRT–HDAC3, in cui modula lo stato della cromatina e reprime programmi di espressione genica a valle di vie quali TNF/NF-κB e la segnalazione MAPK. GPS2 contribuisce inoltre al controllo della segnalazione retrograda mitocondriale e della proteostasi coordinando processi dipendenti dall’ubiquitina e risposte trascrizionali allo stress cellulare. Un’attività di GPS2 deregolata è stata collegata ad alterazioni dell’espressione di geni infiammatori e a fenotipi metabolici, a supporto del suo impiego come nodo per lo studio della coregolazione trascrizionale in contesti rilevanti per la malattia.

Il plasmide CRISPR/Cas9 KO GPS2 (h) è un pool di plasmidi progettato per la distruzione mirata del gene GPS2 in linee cellulari human. Ciascun plasmide co-esprime un singolo RNA guida (sgRNA) unico che prende di mira un sito distinto all'interno del GPS2 insieme alla nucleasi Cas9 di Streptococcus pyogenes. I plasmidi codificano anche per la GFP, consentendo l'identificazione fluorescente e l'arricchimento delle cellule trasfettate con successo tramite microscopia a fluorescenza o citometria a flusso.

Il design multi-guida aumenta la probabilità di generare inserzioni o delezioni (indels) che interrompono il frame di lettura aperto GPS2 a seguito della formazione di rotture a doppio filamento mediate da Cas9. Le rotture del DNA introdotte dal sistema CRISPR/Cas9 vengono riparate attraverso vie endogene di giunzione non omologa (NHEJ), che spesso provocano mutazioni con spostamento del frame che annullano l'espressione della proteina GPS2.

Questo sistema di knockout CRISPR consente la generazione efficiente di modelli cellulari carenti di GPS2 per lo studio della segnalazione di GPS2, studi di genomica funzionale, ricerca sulla biologia del cancro e valutazione delle risposte terapeutiche in linee cellulari umane.

Caratteristiche principali

• sgRNA mirati agli esoni GPS2 critici per la funzione di GPS2
  Co-espressione di SpCas9 e sgRNA da un singolo plasmide per una somministrazione semplificata
  Reporter GFP per l'identificazione delle cellule trasfettate
  Pool di plasmidi mirati a più siti genomici di GPS2 per migliorare l'efficienza del knockout
  Compatibile con la somministrazione tramite trasfezione

Varianti di progettazione

CRISPR +/- HDR

• Gli gRNA codificati dal GPS2 CRISPR/Cas9 KO Plasmid (h) e dal GPS2 CRISPR/Cas9 KO Plasmid (h2) prendono di mira siti distinti all'interno del locus GPS2. Potrebbe essere disponibile uno o entrambi i design di targeting. Vedere Prodotti correlati per la disponibilità.
  I costrutti donatori HDR codificati dal GPS2 Plasmide HDR (h) e il plasmide HDR GPS2 (h2) contengono una cassetta di resistenza alla puromicina e un reporter RFP affiancato da bracci di omologia GPS2 per supportare la riparazione diretta dall'omologia in siti bersaglio GPS2 definiti corrispondenti ai disegni CRISPR/Cas9 KO. La disponibilità dei donatori HDR può variare. Vedere Prodotti correlati per la disponibilità.

Solo per uso di ricerca. Non destinato a uso diagnostico o terapeutico.