Plasmide CRISPR d'Activation (h) GPR91: sc-403394-ACT

SUCNR1 code pour le récepteur humain du succinate GPR91, un RCPG (récepteur couplé aux protéines G) sensible aux métabolites, qui relie une élévation du succinate extracellulaire à des programmes de signalisation en aval, notamment les voies MAPK/ERK et celles dépendantes du calcium. L’activation de GPR91 intègre l’état métabolique cellulaire aux réponses inflammatoires et au stress, influence le comportement des cellules vasculaires et immunitaires, et module la signalisation des cytokines et des chimiokines. Une dérégulation de l’axe succinate–SUCNR1 a été impliquée dans des affections associées à l’hypoxie et à la dysfonction mitochondriale, notamment des pathologies cardiométaboliques et rénales, ainsi que le remodelage tissulaire et des réponses angiogéniques aberrantes. Ainsi, SUCNR1/GPR91 constitue un nœud pertinent pour étudier l’immunométabolisme, la transduction du signal médiée par les RCPG et la détection du microenvironnement dans des systèmes modèles humains.

GPR91 Le plasmide d'activation CRISPR (h) offre une approche ciblée et non destructive pour réguler à la hausse l'expression endogène de SUCNR1 sans modifier la séquence d'ADN sous-jacente.

GPR91 Le plasmide d'activation CRISPR (h) est un système SAM (synergistic activation mediator) à trois plasmides conçu pour une régulation à la hausse hautement efficace et spécifique du locus SUCNR1 dans des lignées cellulaires humaines. Le système s'articule autour d'une Cas9 catalytiquement inactive (dCas9) portant deux mutations inactivantes (D10A et N863A) qui éliminent l'activité nucléase tout en préservant la liaison à l'ADN. Cette dCas9 est fusionnée à VP64, un puissant activateur transcriptionnel, et est co-exprimée avec un gène de résistance à la blasticidine pour la sélection. Le deuxième plasmide code pour la protéine de fusion MS2-p65-HSF1, un complexe activateur secondaire qui agit de concert avec dCas9-VP64, ainsi qu'un gène de résistance à l'hygromycine. Le troisième plasmide code pour un ARN guide (sgRNA) de 20 nt spécifique de la cible, fusionné à deux aptamères d'ARN MS2 qui recrutent le complexe MS2-p65-HSF1 vers le site d'activation, accompagné d'un gène de résistance à la puromycine. Les trois plasmides sont délivrés dans un rapport massique de 1:1:1 pour une expression équilibrée de tous les composants du système.

Une fois assemblé au locus cible, le complexe SAM se lie à environ 200 pb en amont du site de départ de la transcription SUCNR1, où VP64, p65 et HSF1 agissent de concert pour recruter la machinerie transcriptionnelle et induire une régulation à la hausse de l'expression endogène de GPR91. Contrairement à Cas9, qui possède une activité nucléase, dCas9 n'introduit pas de cassures double brin ni ne modifie la séquence génomique, préservant ainsi le locus SUCNR1 natif et permettant l'étude des réponses transcriptionnelles dépendantes de GPR91 au niveau du locus endogène, ce qui en fait un outil précieux pour les études fonctionnelles, l'identification de gènes cibles et la modélisation de la restauration de la voie GPR91 dans les cellules tumorales présentant une expression de SUCNR1 silencée ou réduite.

Réservé à la recherche. N'est pas destiné à un usage diagnostique ou thérapeutique.