Plasmide CRISPR/Cas9 KO GPR78 (h): sc-405837

Présentation

GPR78 code un récepteur couplé aux protéines G impliqué dans la transduction de signaux transmembranaires et la coordination des réponses cellulaires aux signaux extracellulaires. En tant que GPCR, GPR78 est en mesure de moduler des voies de seconds messagers en aval, notamment les signalisations liées à l’AMPc et au calcium, avec des effets potentiels sur les programmes de prolifération, de survie et de motilité cellulaires. Des modifications de l’expression des GPCR ou de la dynamique de leur signalisation sont fréquemment associées à une dérégulation de l’homéostasie tissulaire et à des processus oncogéniques, ce qui rend GPR78 pertinent pour des études mécanistiques en biologie du cancer et des phénotypes de signalisation associés. La caractérisation de la fonction de GPR78 soutient également les efforts de cartographie des voies reliant l’activité du récepteur à des adaptations transcriptionnelles et métaboliques.

Le plasmide CRISPR/Cas9 KO GPR78 (h) est un ensemble de plasmides conçus pour la disruption ciblée du gène GPR78 dans les lignées cellulaires human. Chaque plasmide co-exprime un ARN guide unique (sgRNA) ciblant un site distinct au sein du GPR78, ainsi que la nucléase Cas9 de Streptococcus pyogenes. Les plasmides codent également pour la GFP, ce qui permet l'identification par fluorescence et l'enrichissement des cellules transfectées avec succès par microscopie à fluorescence ou cytométrie en flux.

La conception multi-guide augmente la probabilité de générer des insertions ou des délétions (indels) qui perturbent le cadre de lecture ouvert GPR78 à la suite de la formation de cassures double brin médiées par Cas9. Les cassures d'ADN introduites par le système CRISPR/Cas9 sont réparées par des voies endogènes de jonction non homologue (NHEJ), ce qui entraîne fréquemment des mutations par décalage du cadre de lecture qui suppriment l'expression de la protéine GPR78.

Ce système de knock-out CRISPR permet la génération efficace de modèles cellulaires déficients en GPR78 pour l'étude de la signalisation de GPR78, les études de génomique fonctionnelle, la recherche en biologie du cancer et l'évaluation des réponses thérapeutiques dans des lignées cellulaires humaines.

Caractéristiques principales

• sgRNA ciblant le ou les exons de GPR78 essentiels à la fonction de GPR78
  Co-expression de SpCas9 et de sgRNA à partir d'un seul plasmide pour une administration simplifiée
  Rapporteur GFP pour l'identification des cellules transfectées
  Pool de plasmides ciblant plusieurs sites génomiques de GPR78 pour améliorer l'efficacité du knock-out
  Compatible avec l'administration par transfection

Variantes de conception

CRISPR +/- HDR

• Les gRNA codés par le GPR78 plasmide CRISPR/Cas9 KO (h) et le GPR78 plasmide CRISPR/Cas9 KO (h2) ciblent des sites distincts au sein du locus GPR78. Une ou les deux conceptions de ciblage peuvent être disponibles. Voir les produits associés pour connaître la disponibilité.
  Les constructions donneuses HDR codées par le GPR78 plasmide HDR (h) et le GPR78 (h2) contiennent une cassette de résistance à la puromycine et un rapporteur RFP flanqué de bras d'homologie GPR78 pour permettre la réparation dirigée par homologie au niveau de sites cibles GPR78 définis correspondant aux conceptions CRISPR/Cas9 KO. La disponibilité des donneurs HDR peut varier. Voir les produits associés pour connaître la disponibilité.

Réservé à la recherche. N'est pas destiné à un usage diagnostique ou thérapeutique.