Plasmide Double Nickase (h) GPR54: sc-403766-NIC
- Espèces cibles: human
- 20 µg d'ADN plasmidique purifié et prêt à transfecter; Jusqu'à 20 transfections
- Le Plasmide Double Nickase (h) GPR54 correspond à une paire de plasmides chacun codant la nucléase Cas9 mutante D10A et un ARN guide (gARN) cible de 20 nt specifique, élaboré pour le knockout optimal de l'expression d'un gène avec une plus grande spécificité que le plasmide KO CRISPR/Cas9 correspondant.
- Les séquences des paires d'ARNg sont décalées de 20 pb environ pour induire avec la Cas9 une double entaille spécifique de l'ADN génomique, qui imite un DSB
- L'un des plasmides de la paire contient un gène de résistance à la puromycine; l'autre plasmide de la paire contient un marqueur GFP pour confirmer visuellement la transfection
- Le plasmide GPR54 Double Nickase (h) et le plasmide GPR54 Double Nickase (h2) codent pour des paires distinctes de gRNA ciblant KISS1R. Un ou les deux modèles peuvent être disponibles
Informations pour la commande
| Nom du produit | Ref. Catalogue | COND. | Prix HT | QTÉ | Favoris | |
Plasmide Double Nickase (h) GPR54 | sc-403766-NIC | 20 µg | $410.00 | |||
Plasmide Double Nickase (h2) GPR54 | sc-403766-NIC-2 | 20 µg | $410.00 |
KISS1R code pour le récepteur couplé aux protéines G GPR54 (également appelé KISS1R), un récepteur à haute affinité des kisspeptines qui régule l’activité des neurones à GnRH et relie les signaux métaboliques et développementaux à l’activation de l’axe hypothalamo–hypophyso–gonadique. Après liaison du ligand, GPR54 signale principalement via Gαq/11 pour stimuler la phospholipase C, la mobilisation du Ca²⁺ intracellulaire et l’activité en aval de la voie MAPK/ERK, influençant l’expression génique et la sécrétion neuroendocrinienne. Une signalisation KISS1R altérée est associée à des phénotypes endocriniens de la reproduction, notamment l’hypogonadisme hypogonadotrope et des troubles du calendrier pubertaire, et elle a été étudiée pour ses rôles dans des programmes de migration et d’invasion cellulaires dans divers systèmes modèles. Ces caractéristiques font de KISS1R une cible utile pour étudier la signalisation calcique pilotée par les GPCR, la régulation neuroendocrinienne et les interactions entre voies dans des cellules humaines.
GPR54 Le plasmide double nickase (h) se compose d'une paire de plasmides appariés, conçus pour une édition hautement spécifique du locus KISS1R dans les lignées cellulaires human. Chaque plasmide exprime une nickase Cas9 D10A et un sgRNA distinct ciblant des brins d'ADN opposés au sein de KISS1R. Lorsqu'elles sont dirigées vers des sites adjacents sur des brins d'ADN opposés, les deux nickases génèrent des cassures simple brin décalées qui, ensemble, produisent une cassure double brin décalée, nécessitant une activité coordonnée sur la cible de la part des deux guides. La cassure d'ADN qui en résulte est résolue par les voies de réparation cellulaires endogènes, le plus souvent par jonction non homologue (NHEJ), ce qui conduit à des insertions ou des délétions qui perturbent la fonction de KISS1R. En nécessitant l'engagement de deux ARNsg au locus cible, l'approche par double nick améliore la spécificité de l'édition et offre une stratégie CRISPR complémentaire pour les applications où un contrôle supplémentaire de la précision du ciblage est souhaité.
Afin de faciliter l'identification efficace des cellules éditées, un plasmide code pour la GFP permettant la visualisation par fluorescence des populations transfectées, tandis que le plasmide compagnon porte un gène de résistance à la puromycine pour la sélection antibiotique. Ensemble, ces caractéristiques favorisent l'enrichissement efficace des populations co-transfectées et simplifient la validation des clones présentant une perturbation de KISS1R.
Réservé à la recherche. N'est pas destiné à un usage diagnostique ou thérapeutique.