Plasmide CRISPR/Cas9 KO GPR41 (h): sc-402190

Présentation

FFAR3 code pour le récepteur couplé aux protéines G GPR41, un capteur de surface cellulaire des acides gras à chaîne courte (AGCC) tels que l’acétate, le propionate et le butyrate, produits par la fermentation microbienne. Lors de la liaison du ligand, GPR41 se couple principalement à la signalisation Gi/o, ce qui réduit l’AMPc et module des voies en aval influençant, selon le contexte, le métabolisme cellulaire, les programmes de sécrétion et le tonus inflammatoire. L’activité de FFAR3 a été associée à la communication hôte–microbiome, à la régulation de l’équilibre énergétique ainsi qu’aux réseaux de signalisation neuroendocriniens et immunitaires. Des altérations de la signalisation FFAR3/GPR41 sont étudiées dans la biologie des maladies métaboliques et inflammatoires, où elles peuvent affecter l’adiposité, la sensibilité à l’insuline et des réponses associées aux cytokines, sans pour autant préjuger d’issues cliniques.

Le plasmide CRISPR/Cas9 KO GPR41 (h) est un ensemble de plasmides conçus pour la disruption ciblée du gène FFAR3 dans les lignées cellulaires human. Chaque plasmide co-exprime un ARN guide unique (sgRNA) ciblant un site distinct au sein du FFAR3, ainsi que la nucléase Cas9 de Streptococcus pyogenes. Les plasmides codent également pour la GFP, ce qui permet l'identification par fluorescence et l'enrichissement des cellules transfectées avec succès par microscopie à fluorescence ou cytométrie en flux.

La conception multi-guide augmente la probabilité de générer des insertions ou des délétions (indels) qui perturbent le cadre de lecture ouvert FFAR3 à la suite de la formation de cassures double brin médiées par Cas9. Les cassures d'ADN introduites par le système CRISPR/Cas9 sont réparées par des voies endogènes de jonction non homologue (NHEJ), ce qui entraîne fréquemment des mutations par décalage du cadre de lecture qui suppriment l'expression de la protéine GPR41.

Ce système de knock-out CRISPR permet la génération efficace de modèles cellulaires déficients en FFAR3 pour l'étude de la signalisation de GPR41, les études de génomique fonctionnelle, la recherche en biologie du cancer et l'évaluation des réponses thérapeutiques dans des lignées cellulaires humaines.

Caractéristiques principales

• sgRNA ciblant le ou les exons de FFAR3 essentiels à la fonction de GPR41
  Co-expression de SpCas9 et de sgRNA à partir d'un seul plasmide pour une administration simplifiée
  Rapporteur GFP pour l'identification des cellules transfectées
  Pool de plasmides ciblant plusieurs sites génomiques de FFAR3 pour améliorer l'efficacité du knock-out
  Compatible avec l'administration par transfection

Variantes de conception

CRISPR +/- HDR

• Les gRNA codés par le GPR41 plasmide CRISPR/Cas9 KO (h) et le GPR41 plasmide CRISPR/Cas9 KO (h2) ciblent des sites distincts au sein du locus FFAR3. Une ou les deux conceptions de ciblage peuvent être disponibles. Voir les produits associés pour connaître la disponibilité.
  Les constructions donneuses HDR codées par le GPR41 plasmide HDR (h) et le GPR41 (h2) contiennent une cassette de résistance à la puromycine et un rapporteur RFP flanqué de bras d'homologie FFAR3 pour permettre la réparation dirigée par homologie au niveau de sites cibles FFAR3 définis correspondant aux conceptions CRISPR/Cas9 KO. La disponibilité des donneurs HDR peut varier. Voir les produits associés pour connaître la disponibilité.

Réservé à la recherche. N'est pas destiné à un usage diagnostique ou thérapeutique.