Plasmide CRISPR/Cas9 KO GPR40 (h): sc-401434

Présentation

FFAR1 code le récepteur des acides gras libres 1 (GPR40), un récepteur couplé aux protéines G activé par des acides gras à chaîne moyenne et longue, qui se couple principalement à la signalisation Gq/11. Lorsqu’il est activé, GPR40 favorise l’activité de la phospholipase C, la mobilisation du calcium intracellulaire et des voies de kinases en aval qui régulent le couplage stimulus-sécrétion et les réponses métaboliques cellulaires. Dans les îlots pancréatiques et d’autres tissus métaboliques apparentés, ce récepteur intègre des signaux d’origine lipidique aux mécanismes de détection des nutriments, influençant la dynamique de sécrétion de l’insuline et, plus largement, les réseaux de l’homéostasie du glucose. Une dérégulation de la signalisation FFAR1/GPR40 a été associée à des phénotypes liés aux maladies métaboliques, notamment une altération de la fonction des cellules bêta et une signalisation inflammatoire induite par les lipides, ce qui souligne son intérêt pour les études mécanistiques en recherche sur le diabète et l’obésité.

Le plasmide CRISPR/Cas9 KO GPR40 (h) est un ensemble de plasmides conçus pour la disruption ciblée du gène FFAR1 dans les lignées cellulaires human. Chaque plasmide co-exprime un ARN guide unique (sgRNA) ciblant un site distinct au sein du FFAR1, ainsi que la nucléase Cas9 de Streptococcus pyogenes. Les plasmides codent également pour la GFP, ce qui permet l'identification par fluorescence et l'enrichissement des cellules transfectées avec succès par microscopie à fluorescence ou cytométrie en flux.

La conception multi-guide augmente la probabilité de générer des insertions ou des délétions (indels) qui perturbent le cadre de lecture ouvert FFAR1 à la suite de la formation de cassures double brin médiées par Cas9. Les cassures d'ADN introduites par le système CRISPR/Cas9 sont réparées par des voies endogènes de jonction non homologue (NHEJ), ce qui entraîne fréquemment des mutations par décalage du cadre de lecture qui suppriment l'expression de la protéine GPR40.

Ce système de knock-out CRISPR permet la génération efficace de modèles cellulaires déficients en FFAR1 pour l'étude de la signalisation de GPR40, les études de génomique fonctionnelle, la recherche en biologie du cancer et l'évaluation des réponses thérapeutiques dans des lignées cellulaires humaines.

Caractéristiques principales

• sgRNA ciblant le ou les exons de FFAR1 essentiels à la fonction de GPR40
  Co-expression de SpCas9 et de sgRNA à partir d'un seul plasmide pour une administration simplifiée
  Rapporteur GFP pour l'identification des cellules transfectées
  Pool de plasmides ciblant plusieurs sites génomiques de FFAR1 pour améliorer l'efficacité du knock-out
  Compatible avec l'administration par transfection

Variantes de conception

CRISPR +/- HDR

• Les gRNA codés par le GPR40 plasmide CRISPR/Cas9 KO (h) et le GPR40 plasmide CRISPR/Cas9 KO (h2) ciblent des sites distincts au sein du locus FFAR1. Une ou les deux conceptions de ciblage peuvent être disponibles. Voir les produits associés pour connaître la disponibilité.
  Les constructions donneuses HDR codées par le GPR40 plasmide HDR (h) et le GPR40 (h2) contiennent une cassette de résistance à la puromycine et un rapporteur RFP flanqué de bras d'homologie FFAR1 pour permettre la réparation dirigée par homologie au niveau de sites cibles FFAR1 définis correspondant aux conceptions CRISPR/Cas9 KO. La disponibilité des donneurs HDR peut varier. Voir les produits associés pour connaître la disponibilité.

Réservé à la recherche. N'est pas destiné à un usage diagnostique ou thérapeutique.