GPR39 CRISPR/Cas9 KO Plasmid (m): sc-427882

Übersicht

Gpr39 kodiert GPR39, einen zinksensitiven G‑Protein‑gekoppelten Rezeptor, der an der Regulation intrazellulärer Signalkaskaden beteiligt ist, welche Zellüberleben, Sekretion und den Entzündungsstatus prägen. In Mausmodellen wurde GPR39-Aktivität mit der Modulation cAMP- und Ca2+-abhängiger Signalwege sowie nachgeschalteter Kinase-Signalübertragung in Verbindung gebracht und beeinflusst dabei die Funktion der Epithelbarriere, neuronale Signalübertragung und die metabolische Homöostase. Veränderte GPR39-Signalgebung wurde in Zusammenhängen wie metabolischer Dysfunktion, gastrointestinalen Entzündungen und neuroverhaltensbezogenen Phänotypen untersucht, was GPR39 zu einem nützlichen Knotenpunkt für die Analyse von Signalwegen macht. Als Membranrezeptor, der extrazelluläre Reize mit transkriptionellen und metabolischen Outputs verknüpft, stellt GPR39 ein gut handhabbares Ziel dar, um GPCR-getriebene Netzwerke in vivo und in Zellkulturen zu untersuchen.

Das GPR39 CRISPR/Cas9-KO-Plasmid (m) ist ein Pool von Plasmiden, die für die gezielte Disruption des Gpr39-Gens in mouse-Zelllinien entwickelt wurden. Jedes Plasmid koexprimiert eine einzigartige Single-Guide-RNA (sgRNA), die auf eine bestimmte Stelle innerhalb des Gpr39-Gens abzielt, zusammen mit der Streptococcus pyogenes Cas9-Nuklease. Die Plasmide kodieren zudem für GFP, was die fluoreszente Identifizierung und Anreicherung erfolgreich transfizierter Zellen mittels Fluoreszenzmikroskopie oder Durchflusszytometrie ermöglicht.

Das Multi-Guide-Design erhöht die Wahrscheinlichkeit, dass Insertionen oder Deletionen (Indels) entstehen, die den offenen Leserahmen von Gpr39 nach der Cas9-vermittelten Bildung von Doppelstrangbrüchen unterbrechen. Durch das CRISPR/Cas9-System verursachte DNA-Brüche werden über endogene NHEJ-Wege (Non-Homologous End Joining) repariert, was häufig zu Frameshift-Mutationen führt, die die GPR39-Proteinexpression aufheben.

Dieses CRISPR-Knockout-System ermöglicht die effiziente Erzeugung von Gpr39-defizienten Zellmodellen zur Untersuchung der GPR39-Signalübertragung, für funktionelle Genomstudien, in der Krebsbiologieforschung sowie zur Bewertung therapeutischer Reaktionen in menschlichen Zelllinien.

Hauptmerkmale

• sgRNAs, die auf Gpr39-Exone abzielen, die für die GPR39-Funktion entscheidend sind
  Ko-Expression von SpCas9 und sgRNA aus einem einzigen Plasmid zur vereinfachten Verabreichung
  GFP-Reporter zur Identifizierung transfizierter Zellen
  Pool von Plasmiden, die auf mehrere Gpr39-Genomstellen abzielen, um die Knockout-Effizienz zu verbessern
  Kompatibel mit der Verabreichung durch Transfektion

Designvarianten

CRISPRs +/- HDRs

• gRNAs, die vom GPR39 CRISPR/Cas9-KO-Plasmid (m) und vom GPR39 CRISPR/Cas9-KO-Plasmid (m2) kodiert werden, zielen auf unterschiedliche Stellen innerhalb des Gpr39-Lokus ab. Es kann ein oder beide Targeting-Designs verfügbar sein. Siehe „Verwandte Produkte“ für Verfügbarkeit.
  HDR-Donorkonstrukte, kodiert durch das GPR39 HDR-Plasmid (m) und GPR39 HDR-Plasmid (m2) kodiert, enthalten eine Puromycin-Resistenzkassette und einen RFP-Reporter, flankiert von Gpr39-Homologiearmen, um die homologe Reparatur an definierten Gpr39-Zielstellen entsprechend den CRISPR/Cas9-KO-Designs zu unterstützen. Die Verfügbarkeit von HDR-Donoren kann variieren. Siehe „Verwandte Produkte“ für Verfügbarkeit.

Nur für Forschungszwecke. Nicht für diagnostische oder therapeutische Zwecke bestimmt.