Plasmide CRISPR d'Activation (h) GPR35: sc-416792-ACT

GPR35 code un récepteur couplé aux protéines G de classe A, enrichi dans les tissus immunitaires et gastro-intestinaux, qui s’associe à des protéines G hétérotrimériques afin de réguler la signalisation intracellulaire par seconds messagers. Parmi les ligands rapportés figurent de petites molécules associées au microbiome et au métabolisme, ce qui place GPR35 comme un capteur reliant les signaux environnementaux aux réponses cellulaires. Les voies en aval impliquent le plus souvent une modulation de l’AMPc, des flux de Ca²⁺ et de la signalisation ERK/MAPK, avec des effets sur la chimiotaxie, la fonction de barrière et la production de médiateurs inflammatoires. Des altérations de l’expression ou de la signalisation de GPR35 ont été associées à une susceptibilité aux maladies inflammatoires de l’intestin ainsi qu’à des phénotypes immunométaboliques plus larges, ce qui étaye sa pertinence dans les études de l’immunité muqueuse et de l’inflammation.

GPR35 Le plasmide d'activation CRISPR (h) offre une approche ciblée et non destructive pour réguler à la hausse l'expression endogène de GPR35 sans modifier la séquence d'ADN sous-jacente.

GPR35 Le plasmide d'activation CRISPR (h) est un système SAM (synergistic activation mediator) à trois plasmides conçu pour une régulation à la hausse hautement efficace et spécifique du locus GPR35 dans des lignées cellulaires humaines. Le système s'articule autour d'une Cas9 catalytiquement inactive (dCas9) portant deux mutations inactivantes (D10A et N863A) qui éliminent l'activité nucléase tout en préservant la liaison à l'ADN. Cette dCas9 est fusionnée à VP64, un puissant activateur transcriptionnel, et est co-exprimée avec un gène de résistance à la blasticidine pour la sélection. Le deuxième plasmide code pour la protéine de fusion MS2-p65-HSF1, un complexe activateur secondaire qui agit de concert avec dCas9-VP64, ainsi qu'un gène de résistance à l'hygromycine. Le troisième plasmide code pour un ARN guide (sgRNA) de 20 nt spécifique de la cible, fusionné à deux aptamères d'ARN MS2 qui recrutent le complexe MS2-p65-HSF1 vers le site d'activation, accompagné d'un gène de résistance à la puromycine. Les trois plasmides sont délivrés dans un rapport massique de 1:1:1 pour une expression équilibrée de tous les composants du système.

Une fois assemblé au locus cible, le complexe SAM se lie à environ 200 pb en amont du site de départ de la transcription GPR35, où VP64, p65 et HSF1 agissent de concert pour recruter la machinerie transcriptionnelle et induire une régulation à la hausse de l'expression endogène de GPR35. Contrairement à Cas9, qui possède une activité nucléase, dCas9 n'introduit pas de cassures double brin ni ne modifie la séquence génomique, préservant ainsi le locus GPR35 natif et permettant l'étude des réponses transcriptionnelles dépendantes de GPR35 au niveau du locus endogène, ce qui en fait un outil précieux pour les études fonctionnelles, l'identification de gènes cibles et la modélisation de la restauration de la voie GPR35 dans les cellules tumorales présentant une expression de GPR35 silencée ou réduite.

Réservé à la recherche. N'est pas destiné à un usage diagnostique ou thérapeutique.