Plasmide CRISPR/Cas9 KO GPR22 (m): sc-428483

Présentation

Gpr22 code pour GPR22, un récepteur orphelin couplé aux protéines G principalement étudié en biologie cardiaque et vasculaire, où il est associé à la régulation de voies de signalisation sensibles au stress et de programmes de remodelage cellulaire. Bien que son ligand endogène reste inconnu, un couplage de type GPCR suggère une influence potentielle sur des voies de seconds messagers telles que la signalisation cAMP/PKA et MAPK, qui modulent les réponses transcriptionnelles, le métabolisme et la fonction contractile. Dans des modèles murins et des études d’expression, GPR22 a été associé à des phénotypes cardiovasculaires, notamment l’hypertrophie cardiaque et le remodelage lié à l’insuffisance cardiaque, ce qui motive l’exploration de son rôle dans l’homéostasie des cardiomyocytes et des cellules vasculaires. Gpr22 est également utilisé comme marqueur dans des profils transcriptionnels spécifiques de tissu afin de relier des états de signalisation des GPCR à des réseaux de gènes pertinents pour les maladies.

Le plasmide CRISPR/Cas9 KO GPR22 (m) est un ensemble de plasmides conçus pour la disruption ciblée du gène Gpr22 dans les lignées cellulaires mouse. Chaque plasmide co-exprime un ARN guide unique (sgRNA) ciblant un site distinct au sein du Gpr22, ainsi que la nucléase Cas9 de Streptococcus pyogenes. Les plasmides codent également pour la GFP, ce qui permet l'identification par fluorescence et l'enrichissement des cellules transfectées avec succès par microscopie à fluorescence ou cytométrie en flux.

La conception multi-guide augmente la probabilité de générer des insertions ou des délétions (indels) qui perturbent le cadre de lecture ouvert Gpr22 à la suite de la formation de cassures double brin médiées par Cas9. Les cassures d'ADN introduites par le système CRISPR/Cas9 sont réparées par des voies endogènes de jonction non homologue (NHEJ), ce qui entraîne fréquemment des mutations par décalage du cadre de lecture qui suppriment l'expression de la protéine GPR22.

Ce système de knock-out CRISPR permet la génération efficace de modèles cellulaires déficients en Gpr22 pour l'étude de la signalisation de GPR22, les études de génomique fonctionnelle, la recherche en biologie du cancer et l'évaluation des réponses thérapeutiques dans des lignées cellulaires humaines.

Caractéristiques principales

• sgRNA ciblant le ou les exons de Gpr22 essentiels à la fonction de GPR22
  Co-expression de SpCas9 et de sgRNA à partir d'un seul plasmide pour une administration simplifiée
  Rapporteur GFP pour l'identification des cellules transfectées
  Pool de plasmides ciblant plusieurs sites génomiques de Gpr22 pour améliorer l'efficacité du knock-out
  Compatible avec l'administration par transfection

Variantes de conception

CRISPR +/- HDR

• Les gRNA codés par le GPR22 plasmide CRISPR/Cas9 KO (m) et le GPR22 plasmide CRISPR/Cas9 KO (m2) ciblent des sites distincts au sein du locus Gpr22. Une ou les deux conceptions de ciblage peuvent être disponibles. Voir les produits associés pour connaître la disponibilité.
  Les constructions donneuses HDR codées par le GPR22 plasmide HDR (m) et le GPR22 (m2) contiennent une cassette de résistance à la puromycine et un rapporteur RFP flanqué de bras d'homologie Gpr22 pour permettre la réparation dirigée par homologie au niveau de sites cibles Gpr22 définis correspondant aux conceptions CRISPR/Cas9 KO. La disponibilité des donneurs HDR peut varier. Voir les produits associés pour connaître la disponibilité.

Réservé à la recherche. N'est pas destiné à un usage diagnostique ou thérapeutique.