Plasmide Double Nickase (h) GPR17: sc-402977-NIC
- Espèces cibles: human
- 20 µg d'ADN plasmidique purifié et prêt à transfecter; Jusqu'à 20 transfections
- Le Plasmide Double Nickase (h) GPR17 correspond à une paire de plasmides chacun codant la nucléase Cas9 mutante D10A et un ARN guide (gARN) cible de 20 nt specifique, élaboré pour le knockout optimal de l'expression d'un gène avec une plus grande spécificité que le plasmide KO CRISPR/Cas9 correspondant.
- Les séquences des paires d'ARNg sont décalées de 20 pb environ pour induire avec la Cas9 une double entaille spécifique de l'ADN génomique, qui imite un DSB
- L'un des plasmides de la paire contient un gène de résistance à la puromycine; l'autre plasmide de la paire contient un marqueur GFP pour confirmer visuellement la transfection
- Le plasmide GPR17 Double Nickase (h) et le plasmide GPR17 Double Nickase (h2) codent pour des paires distinctes de gRNA ciblant GPR17. Un ou les deux modèles peuvent être disponibles
- Après transfection, l'efficacité de knockout de gène peut être évaluée par WB, IF ou IHC en utilisant l'anticorps: GPR17 Antibody (A-10): sc-514723
Informations pour la commande
| Nom du produit | Ref. Catalogue | COND. | Prix HT | QTÉ | Favoris | |
Plasmide Double Nickase (h) GPR17 | sc-402977-NIC | 20 µg | $410.00 | |||
Plasmide Double Nickase (h2) GPR17 | sc-402977-NIC-2 | 20 µg | $410.00 |
GPR17 code un récepteur couplé aux protéines G de type rhodopsine, qui intègre des signaux extracellulaires purinergiques et liés aux leucotriènes cystéinylés afin de moduler des voies intracellulaires de seconds messagers, notamment la signalisation dépendante de l’AMPc et du calcium. Dans le système nerveux central, l’expression de GPR17 est enrichie dans les cellules de la lignée oligodendrocytaire et est impliquée dans la coordination du calendrier des programmes de différenciation et de myélinisation, reliant l’activité du récepteur à des signaux neuroinflammatoires et au remodelage tissulaire. Le récepteur a également été étudié dans des contextes de réponse au stress ischémique et de signalisation inflammatoire, où une signalisation GPCR altérée peut remodeler les états d’activation gliale et les réseaux transcriptionnels en aval. Ainsi, GPR17 constitue une cible utile pour disséquer la régulation, pilotée par les GPCR, du développement neural, de la signalisation associée à l’inflammation et des transitions de destinée cellulaire.
GPR17 Le plasmide double nickase (h) se compose d'une paire de plasmides appariés, conçus pour une édition hautement spécifique du locus GPR17 dans les lignées cellulaires human. Chaque plasmide exprime une nickase Cas9 D10A et un sgRNA distinct ciblant des brins d'ADN opposés au sein de GPR17. Lorsqu'elles sont dirigées vers des sites adjacents sur des brins d'ADN opposés, les deux nickases génèrent des cassures simple brin décalées qui, ensemble, produisent une cassure double brin décalée, nécessitant une activité coordonnée sur la cible de la part des deux guides. La cassure d'ADN qui en résulte est résolue par les voies de réparation cellulaires endogènes, le plus souvent par jonction non homologue (NHEJ), ce qui conduit à des insertions ou des délétions qui perturbent la fonction de GPR17. En nécessitant l'engagement de deux ARNsg au locus cible, l'approche par double nick améliore la spécificité de l'édition et offre une stratégie CRISPR complémentaire pour les applications où un contrôle supplémentaire de la précision du ciblage est souhaité.
Afin de faciliter l'identification efficace des cellules éditées, un plasmide code pour la GFP permettant la visualisation par fluorescence des populations transfectées, tandis que le plasmide compagnon porte un gène de résistance à la puromycine pour la sélection antibiotique. Ensemble, ces caractéristiques favorisent l'enrichissement efficace des populations co-transfectées et simplifient la validation des clones présentant une perturbation de GPR17.
Réservé à la recherche. N'est pas destiné à un usage diagnostique ou thérapeutique.