Plasmide CRISPR d'Activation (h) GPR158: sc-407138-ACT

GPR158 (récepteur 158 couplé aux protéines G) est un RCPG orphelin de classe C, fortement exprimé dans le système nerveux et associé à la régulation de l’excitabilité neuronale, de la signalisation synaptique et des réponses neuroendocriniennes. Il est souvent décrit comme un modulateur de type « échafaudage » des voies des RCPG, capable d’influencer les sorties de signalisation liées à l’AMPc/PKA ainsi que les programmes transcriptionnels en aval. Une expression altérée de GPR158 a été associée à des phénotypes neuropsychiatriques et à la signalisation liée au stress, et a également été étudiée dans le contexte de la biologie tumorale et de la régulation de la croissance cellulaire. Ces caractéristiques font de GPR158 une cible utile pour explorer les réseaux de signalisation associés aux récepteurs, les mécanismes de plasticité neuronale et les adaptations transcriptionnelles au stress cellulaire.

GPR158 Le plasmide d'activation CRISPR (h) offre une approche ciblée et non destructive pour réguler à la hausse l'expression endogène de GPR158 sans modifier la séquence d'ADN sous-jacente.

GPR158 Le plasmide d'activation CRISPR (h) est un système SAM (synergistic activation mediator) à trois plasmides conçu pour une régulation à la hausse hautement efficace et spécifique du locus GPR158 dans des lignées cellulaires humaines. Le système s'articule autour d'une Cas9 catalytiquement inactive (dCas9) portant deux mutations inactivantes (D10A et N863A) qui éliminent l'activité nucléase tout en préservant la liaison à l'ADN. Cette dCas9 est fusionnée à VP64, un puissant activateur transcriptionnel, et est co-exprimée avec un gène de résistance à la blasticidine pour la sélection. Le deuxième plasmide code pour la protéine de fusion MS2-p65-HSF1, un complexe activateur secondaire qui agit de concert avec dCas9-VP64, ainsi qu'un gène de résistance à l'hygromycine. Le troisième plasmide code pour un ARN guide (sgRNA) de 20 nt spécifique de la cible, fusionné à deux aptamères d'ARN MS2 qui recrutent le complexe MS2-p65-HSF1 vers le site d'activation, accompagné d'un gène de résistance à la puromycine. Les trois plasmides sont délivrés dans un rapport massique de 1:1:1 pour une expression équilibrée de tous les composants du système.

Une fois assemblé au locus cible, le complexe SAM se lie à environ 200 pb en amont du site de départ de la transcription GPR158, où VP64, p65 et HSF1 agissent de concert pour recruter la machinerie transcriptionnelle et induire une régulation à la hausse de l'expression endogène de GPR158. Contrairement à Cas9, qui possède une activité nucléase, dCas9 n'introduit pas de cassures double brin ni ne modifie la séquence génomique, préservant ainsi le locus GPR158 natif et permettant l'étude des réponses transcriptionnelles dépendantes de GPR158 au niveau du locus endogène, ce qui en fait un outil précieux pour les études fonctionnelles, l'identification de gènes cibles et la modélisation de la restauration de la voie GPR158 dans les cellules tumorales présentant une expression de GPR158 silencée ou réduite.

Réservé à la recherche. N'est pas destiné à un usage diagnostique ou thérapeutique.