Plasmide CRISPR d'Activation (h) GPR120: sc-401362-ACT

FFAR4 code pour GPR120, un récepteur couplé aux protéines G (RCPG) sensible aux acides gras à longue chaîne, qui se couple à des voies de signalisation dépendantes de Gαq/11 et de la β-arrestine afin de moduler la dynamique du calcium intracellulaire et des programmes transcriptionnels. Dans les tissus métaboliques et les cellules immunitaires, GPR120 influence la détection des lipides, la signalisation inflammatoire et des voies sensibilisantes à l’insuline, reliant la disponibilité en nutriments aux réponses cellulaires au stress et à la production de cytokines. Parmi les processus en aval rapportés figurent la régulation de la signalisation MAPK/ERK, des cascades inflammatoires associées à NF-κB et des programmes de différenciation adipogénique. Une activité dérégulée de FFAR4/GPR120 a été associée à des phénotypes métaboliques liés à l’obésité, à la résistance à l’insuline et à des états inflammatoires chroniques, ce qui motive des études mécanistiques dans des modèles d’adipocytes, de macrophages et de cellules épithéliales.

GPR120 Le plasmide d'activation CRISPR (h) offre une approche ciblée et non destructive pour réguler à la hausse l'expression endogène de FFAR4 sans modifier la séquence d'ADN sous-jacente.

GPR120 Le plasmide d'activation CRISPR (h) est un système SAM (synergistic activation mediator) à trois plasmides conçu pour une régulation à la hausse hautement efficace et spécifique du locus FFAR4 dans des lignées cellulaires humaines. Le système s'articule autour d'une Cas9 catalytiquement inactive (dCas9) portant deux mutations inactivantes (D10A et N863A) qui éliminent l'activité nucléase tout en préservant la liaison à l'ADN. Cette dCas9 est fusionnée à VP64, un puissant activateur transcriptionnel, et est co-exprimée avec un gène de résistance à la blasticidine pour la sélection. Le deuxième plasmide code pour la protéine de fusion MS2-p65-HSF1, un complexe activateur secondaire qui agit de concert avec dCas9-VP64, ainsi qu'un gène de résistance à l'hygromycine. Le troisième plasmide code pour un ARN guide (sgRNA) de 20 nt spécifique de la cible, fusionné à deux aptamères d'ARN MS2 qui recrutent le complexe MS2-p65-HSF1 vers le site d'activation, accompagné d'un gène de résistance à la puromycine. Les trois plasmides sont délivrés dans un rapport massique de 1:1:1 pour une expression équilibrée de tous les composants du système.

Une fois assemblé au locus cible, le complexe SAM se lie à environ 200 pb en amont du site de départ de la transcription FFAR4, où VP64, p65 et HSF1 agissent de concert pour recruter la machinerie transcriptionnelle et induire une régulation à la hausse de l'expression endogène de GPR120. Contrairement à Cas9, qui possède une activité nucléase, dCas9 n'introduit pas de cassures double brin ni ne modifie la séquence génomique, préservant ainsi le locus FFAR4 natif et permettant l'étude des réponses transcriptionnelles dépendantes de GPR120 au niveau du locus endogène, ce qui en fait un outil précieux pour les études fonctionnelles, l'identification de gènes cibles et la modélisation de la restauration de la voie GPR120 dans les cellules tumorales présentant une expression de FFAR4 silencée ou réduite.

Réservé à la recherche. N'est pas destiné à un usage diagnostique ou thérapeutique.