Plasmide Double Nickase (m) GPR105: sc-431244-NIC
- Espèces cibles: mouse
- 20 µg d'ADN plasmidique purifié et prêt à transfecter; Jusqu'à 20 transfections
- Le Plasmide Double Nickase (m) GPR105 correspond à une paire de plasmides chacun codant la nucléase Cas9 mutante D10A et un ARN guide (gARN) cible de 20 nt specifique, élaboré pour le knockout optimal de l'expression d'un gène avec une plus grande spécificité que le plasmide KO CRISPR/Cas9 correspondant.
- Les séquences des paires d'ARNg sont décalées de 20 pb environ pour induire avec la Cas9 une double entaille spécifique de l'ADN génomique, qui imite un DSB
- L'un des plasmides de la paire contient un gène de résistance à la puromycine; l'autre plasmide de la paire contient un marqueur GFP pour confirmer visuellement la transfection
- Le plasmide GPR105 Double Nickase (m) et le plasmide GPR105 Double Nickase (m2) codent pour des paires distinctes de gRNA ciblant P2ry14. Un ou les deux modèles peuvent être disponibles
Informations pour la commande
| Nom du produit | Ref. Catalogue | COND. | Prix HT | QTÉ | Favoris | |
Plasmide Double Nickase (m) GPR105 | sc-431244-NIC | 20 µg | $410.00 | |||
Plasmide Double Nickase (m2) GPR105 | sc-431244-NIC-2 | 20 µg | $410.00 |
La protéine murine P2ry14 code le récepteur couplé aux protéines G GPR105 (P2Y14), un récepteur des sucres nucléotidiques activé par des UDP-sucres tels que l’UDP-glucose et se couplant principalement à la signalisation via Gi. L’activation de GPR105 peut moduler les niveaux d’AMPc et influencer des voies en aval qui façonnent la chimiotaxie, la production de cytokines et l’activation de l’immunité innée, avec des rôles rapportés dans la fonction des cellules myéloïdes et l’inflammation associée aux barrières. Dans les systèmes murins, l’activité de P2ry14 a été reliée à des réponses inflammatoires et à la signalisation du stress métabolique, ce qui la rend pertinente pour des études portant sur l’inflammation des voies aériennes et de l’intestin, l’immunométabolisme du tissu adipeux et les processus neuro-inflammatoires impliquant la microglie. En tant que RCPG situé à l’interface entre le métabolisme extracellulaire des nucléotides et la signalisation immunitaire, P2ry14 est fréquemment utilisé pour explorer la régulation purinergique de l’homéostasie tissulaire et des circuits inflammatoires pertinents pour la maladie.
GPR105 Le plasmide double nickase (m) se compose d'une paire de plasmides appariés, conçus pour une édition hautement spécifique du locus P2ry14 dans les lignées cellulaires mouse. Chaque plasmide exprime une nickase Cas9 D10A et un sgRNA distinct ciblant des brins d'ADN opposés au sein de P2ry14. Lorsqu'elles sont dirigées vers des sites adjacents sur des brins d'ADN opposés, les deux nickases génèrent des cassures simple brin décalées qui, ensemble, produisent une cassure double brin décalée, nécessitant une activité coordonnée sur la cible de la part des deux guides. La cassure d'ADN qui en résulte est résolue par les voies de réparation cellulaires endogènes, le plus souvent par jonction non homologue (NHEJ), ce qui conduit à des insertions ou des délétions qui perturbent la fonction de P2ry14. En nécessitant l'engagement de deux ARNsg au locus cible, l'approche par double nick améliore la spécificité de l'édition et offre une stratégie CRISPR complémentaire pour les applications où un contrôle supplémentaire de la précision du ciblage est souhaité.
Afin de faciliter l'identification efficace des cellules éditées, un plasmide code pour la GFP permettant la visualisation par fluorescence des populations transfectées, tandis que le plasmide compagnon porte un gène de résistance à la puromycine pour la sélection antibiotique. Ensemble, ces caractéristiques favorisent l'enrichissement efficace des populations co-transfectées et simplifient la validation des clones présentant une perturbation de P2ry14.
Réservé à la recherche. N'est pas destiné à un usage diagnostique ou thérapeutique.