Datos CRISPR no: la imagen ilustra la calidad de los anticuerpos para visualizar los resultados de los experimentos CRISPR.
Datos CRISPR no: la imagen ilustra la calidad de los anticuerpos para visualizar los resultados de los experimentos CRISPR.
GPI Plásmido CRISPR/Cas9 KO (h): sc-402796
- Especies Diana: human
- 20 µg de plásmido de ADN purificado listo para la trasfección; suficiente para 20 transfecciones máximo
- GPI El plásmido CRISPR/Cas9 Knockout (KO) (h) es un conjunto de plásmidos, cada uno de los cuales codifica la nucleasa Cas9 y un ARN guía (gRNA) de 20 nt específico para el objetivo, diseñado para lograr la máxima eficiencia de knockout utilizando secuencias derivadas de la biblioteca GeCKO v2
- Las secuencias de gRNA dirigen a Cas9 para que induzca roturas de doble cadena (DSB) específicas en el locus genómico GPI, lo que da lugar a la inactivación del gen mediante unión de extremos no homólogos (NHEJ)
- Los genes de resistencia a la puromicina y RFP están flanqueados por sitios LoxP, lo que permite la eliminación de los marcadores de selección mediante la recombinasa Cre (Vector Cre: sc-418923) tras el establecimiento de líneas celulares knockout estables
- Tras la transfección, la eficacia del knockout puede comprobarse mediante WB, IF ó IHC utilzando el anticuerpo: GPI Anticuerpo (H-10): sc-365066
Información sobre pedidos
| Nombre del producto | Número de catálogo | UNIDAD | Precio | CANTIDAD | Favoritos | |
GPI Plásmido CRISPR/Cas9 KO (h) | sc-402796 | 20 µg | $397.00 |
Descripción general
La isomerasa de glucosa-6-fosfato (GPI) es una enzima multifuncional que cataliza la interconversión reversible de glucosa-6-fosfato y fructosa-6-fosfato, un paso central que conecta la glucólisis y la gluconeogénesis. Al controlar el flujo de carbono a través de estas vías, la GPI influye en la producción celular de ATP, la disponibilidad de precursores biosintéticos y el equilibrio redox, moldeando así la adaptación metabólica bajo estrés. Más allá de su función metabólica citosólica, se ha descrito que la GPI participa en contextos de señalización extracelular, vinculando el metabolismo con la motilidad celular y las interacciones con el microambiente. La alteración de la actividad o la expresión de la GPI se asocia con desregulación metabólica y se ha estudiado en contextos que incluyen la anemia debida a una deficiencia enzimática hereditaria y la remodelación metabólica observada en modelos de enfermedades proliferativas.
El plásmido CRISPR/Cas9 KO GPI (h) es un conjunto de plásmidos diseñado para la interrupción dirigida del gen GPI en líneas celulares human. Cada plásmido coexpresa un ARN guía único (sgRNA) dirigido a un sitio distinto dentro del GPI junto con la nucleasa Cas9 de Streptococcus pyogenes. Los plásmidos también codifican GFP, lo que permite la identificación fluorescente y el enriquecimiento de las células transfectadas con éxito mediante microscopía de fluorescencia o citometría de flujo.
El diseño multiguía aumenta la probabilidad de generar inserciones o deleciones (indeles) que interrumpan el marco de lectura abierto de GPI tras la formación de roturas de doble cadena mediadas por Cas9. Las roturas de ADN introducidas por el sistema CRISPR/Cas9 se reparan a través de vías endógenas de unión de extremos no homólogos (NHEJ), lo que con frecuencia da lugar a mutaciones de desplazamiento del marco de lectura que anulan la expresión de la proteína GPI.
Este sistema de knockout CRISPR permite la generación eficiente de modelos celulares deficientes en GPI para la investigación de la señalización de GPI, estudios de genómica funcional, investigación en biología del cáncer y evaluación de respuestas terapéuticas en líneas celulares humanas.
Características principales
- sgRNA dirigidos a los exones de GPI críticos para la función de GPI
Coexpresión de SpCas9 y sgRNA a partir de un único plásmido para simplificar la administración
Reportero GFP para la identificación de células transfectadas
Conjunto de plásmidos dirigidos a múltiples sitios genómicos de GPI para mejorar la eficiencia del knockout
Compatible con la administración mediante transfección
Variantes de diseño
CRISPRs +/- HDRs
- Los gRNA codificados por el plásmido GPI CRISPR/Cas9 KO (h) y el plásmido GPI CRISPR/Cas9 KO (h2) se dirigen a sitios distintos dentro del locus GPI. Puede estar disponible uno o ambos diseños de orientación. Consulte «Productos relacionados» para conocer la disponibilidad.
Las construcciones donantes HDR codificadas por el plásmido HDR GPI (h) y el plásmido HDR GPI (h2) contienen un casete de resistencia a la puromicina y un reportero RFP flanqueado por brazos de homología GPI para facilitar la reparación dirigida por homología en sitios diana GPI definidos que se corresponden con los diseños de KO de CRISPR/Cas9. La disponibilidad de los donantes HDR puede variar. Consulte «Productos relacionados» para conocer la disponibilidad.
Sólo para uso en investigación. No destinado a uso diagnóstico o terapéutico.