Plásmido Doble Nickase (m) GP78: sc-423842-NIC
- Especies Diana: mouse
- 20 µg de plásmido de ADN purificado listo para la trasfección; suficiente para 20 transfecciones máximo
- El Plásmido Double Nickase (m)GP78 consisten en un par de plásmidos cada uno codificando una nucleasa Cas9 mutada D10A y una guia de ARN de 20 nucleótidos (gRNA) diseñados para una mayor especificidad que el homologo CRISPR/Cas9 KO
- Las secuencias de gRNA tienen una diferencia de unas 20 pb para permitir un corte doble mediado por Cas9 en el ADN que imita el doble corte
- Uno de los plásmidos contiene el gen de resistencia a puromicina para la selección y el otro el marcado GFP para confirmar visualmente la transfección
- El plásmido de doble nickasa GP78 (m) y el plásmido de doble nickasa GP78 (m2) codifican diseños distintos de pares de gRNA dirigidos a Amfr. Puede que esté disponible uno o ambos diseños
Información sobre pedidos
| Nombre del producto | Número de catálogo | UNIDAD | Precio | CANTIDAD | Favoritos | |
Plásmido Doble Nickase (m) GP78 | sc-423842-NIC | 20 µg | $410.00 | |||
Plásmido Doble Nickase (m2) GP78 | sc-423842-NIC-2 | 20 µg | $410.00 |
Amfr codifica GP78, una ligasa E3 de ubiquitina residente del retículo endoplásmico (RE) que actúa como un componente clave de la degradación asociada al RE (ERAD) al ubiquitinar proteínas mal plegadas o excedentes para su recambio por el proteasoma. GP78 coopera con enzimas E2 y con factores como p97/VCP para coordinar la retrotranslocación y la eliminación de proteínas clientas del RE, apoyando así la proteostasis y limitando la señalización de estrés del RE. A través de sus funciones en el control de calidad dependiente de ubiquitina, GP78 influye en vías relacionadas con el metabolismo lipídico, la homeostasis mitocondrial y las respuestas adaptativas al estrés. La desregulación de la ERAD y de la señalización por ubiquitina en la que participa GP78 se ha asociado con procesos relevantes para enfermedad, como el desequilibrio metabólico y el estrés proteotóxico, que se estudian con frecuencia en neurodegeneración y biología del cáncer.
GP78 El plásmido de doble nicasa (m) consiste en un par de plásmidos emparejados diseñados para la edición de alta especificidad del locus Amfr en líneas celulares mouse. Cada plásmido expresa una nicasa Cas9 D10A y un ARN guía específico (sgRNA) dirigido a cadenas de ADN opuestas dentro de Amfr. Cuando se dirigen a sitios adyacentes en cadenas de ADN opuestas, las dos nicasas generan cortes en cadena simple desplazados que, juntos, producen una rotura de doble cadena escalonada, lo que requiere una actividad coordinada sobre el objetivo por parte de ambas guías. La rotura de ADN resultante se resuelve mediante vías de reparación celular endógenas, más comúnmente a través de la unión de extremos no homólogos (NHEJ), lo que da lugar a inserciones o deleciones que alteran la función de Amfr. Al requerir la participación de dos ARN guía en el locus diana, el enfoque de doble corte mejora la especificidad de la edición y proporciona una estrategia CRISPR complementaria para aplicaciones en las que se desea un control adicional sobre la precisión de la orientación.
Para facilitar la identificación eficiente de las células editadas, un plásmido codifica GFP para la visualización fluorescente de las poblaciones transfectadas, mientras que el plásmido complementario lleva un gen de resistencia a la puromicina para la selección con antibióticos. En conjunto, estas características facilitan el enriquecimiento eficiente de las poblaciones cotransfectadas y simplifican la validación de los clones con Amfr alterado.
Sólo para uso en investigación. No destinado a uso diagnóstico o terapéutico.