GnT-II CRISPR/Cas9 케이오 플라스미드 (h): sc-407393

개요

MGAT2는 N-아세틸글루코사민전이효소 II(GnT-II)를 암호화하며, 이는 골지체 중간 구획(medial-Golgi)에 위치한 당전이효소로서, 복합형 N-글리칸 합성의 핵심 단계에서 이중안테나(biantennary) 구조의 α1,6-만노스 가지에 β1,2 결합으로 GlcNAc를 첨가합니다. 이러한 활성은 수용체 수송, 세포–세포 부착, 성장인자 신호전달을 조절하는 당단백질의 성숙에 영향을 미쳐, 막 단백질 항상성(proteostasis)과 세포외 상호작용을 형성합니다. MGAT2 의존적 N-글리칸 가지치기와 조성의 변화는 암 관련 맥락에서 비정상적인 세포 신호전달, 이동성 및 침윤성 변화와 연관되어 왔으며, 골지체 처리 결함이 동반되는 선천성 당화장애(congenital disorders of glycosylation)와도 관련이 있습니다. 그 결과 MGAT2는 당단백질체학(glycoproteomics), 분비 경로 생물학, 그리고 N-글리칸 리모델링의 경로 수준 분석에서 자주 연구됩니다.

GnT-II CRISPR/Cas9 KO 플라스미드 (h)는 human 세포주에서 MGAT2 유전자의 표적 파괴를 위해 설계된 플라스미드 풀입니다. 각 플라스미드는 MGAT2 유전자 내의 서로 다른 부위를 표적으로 하는 고유한 단일 가이드 RNA(sgRNA)와 Streptococcus pyogenes Cas9 뉴클레아제를 함께 발현합니다. 또한 이 플라스미드들은 GFP를 암호화하여, 형광 현미경이나 유세포 분석기를 통해 성공적으로 형질전환된 세포를 형광으로 식별하고 농축할 수 있게 합니다.

다중 가이드 설계는 Cas9에 의한 이중 가닥 절단 형성 후 MGAT2의 개방 독서 틀(ORF)을 파괴하는 삽입 또는 결실(indel)이 발생할 가능성을 높입니다. CRISPR/Cas9 시스템에 의해 유발된 DNA 절단은 내인성 비동종 말단 결합(NHEJ) 경로를 통해 복구되며, 이는 종종 GnT-II 단백질 발현을 소멸시키는 프레임 시프트 돌연변이를 초래합니다.

이 CRISPR 녹아웃 시스템은 GnT-II 신호 전달 연구, 기능 유전체학 연구, 암 생물학 연구 및 인간 세포주에서의 치료 반응 평가를 위한 MGAT2 결핍 세포 모델을 효율적으로 생성할 수 있게 합니다.

주요 특징

• GnT-II 기능에 중요한 MGAT2 엑손을 표적하는 sgRNA
  전달을 단순화하기 위해 단일 플라스미드에서 SpCas9 및 sgRNA의 공동 발현
  형질전환된 세포 식별을 위한 GFP 리포터
  녹아웃 효율 향상을 위해 여러 MGAT2 게놈 부위를 표적하는 플라스미드 풀
  형질전환을 통한 전달과 호환

설계 변형

CRISPRs +/- HDR

• GnT-II CRISPR/Cas9 KO 플라스미드 (h) 및 GnT-II CRISPR/Cas9 KO 플라스미드 (h2)에 의해 암호화되는 gRNA는 MGAT2 유전자좌 내의 서로 다른 부위를 표적화합니다. 표적화 설계 중 하나 또는 둘 다 이용 가능할 수 있습니다. 구입 가능 여부는 관련 제품을 참조하십시오.
  GnT-II HDR 플라스미드 (h) 및 GnT-II HDR 플라스미드 (h2)에 의해 암호화되는
  HDR 기증자 컨스트럭트는 푸로마이신 내성 카세트와 RFP 리포터를 포함하며, 이는 CRISPR/Cas9 KO 설계에 해당하는 정의된 MGAT2 표적 부위에서의 상동성 유도 복구를 지원하기 위해 MGAT2 상동성 암으로 둘러싸여 있습니다. HDR 기증자의 재고 여부는 달라질 수 있습니다. 재고 여부는 관련 제품을 참조하십시오.

연구용으로만 사용하세요. 진단 또는 치료용이 아닙니다.