GnRHR Double Nickase Plasmid (h): sc-401783-NIC
- Zielspezies: human
- 20 µg transfektionsfertige, aufgereinigte Plasmid DNA; geeignet für 20 Transfektionen
- Das GnRHR Double Nickase Plasmid (h) wird als Plasmid-Paar geliefert. Die einzelnen Plasmide kodieren für eine D10A mutierte Cas9 Nuklease sowie für je eine unterschiedliche, zielspezifische 20nt guide RNA (gRNA) Sequenz. Dies erlaubt eine hohe Knockout-Effizienz bei gleichzeitig größerer Spezifität als das entsprechende CRISPR/Cas9 KO Plasmid
- gRNA Sequenzpaare liegen ca. 20 bp auseinander um ein spezifisches Cas9-vermitteltes "Double Nicking" der genomischen DNA zu erlauben und so im Resultat den Effekt eines Doppelstrangbruchs nachzuahmen.
- Ein Plasmid kodiert für ein Puromycin-Resistenzgen zur Selektion von stabilen Knockout-Zellen. Das andere Plasmid kodiert für ein GFP-Gen für den visuellen Nachweis der Transfektion
- GnRHR Double-Nickase-Plasmid (h) und GnRHR Double-Nickase-Plasmid (h2) kodieren unterschiedliche gepaarte gRNA-Designs, die auf GNRHR abzielen. Möglicherweise ist eines oder sind beide Designs verfügbar
- Nach der Transfektion kann die Effizienz des Gen-Knockouts per Western Blot oder histologisch mit folgendem Antikörper überprüft werden: GnRHR: sc-69845
Bestellinformation
| Produkt | Katalog # | EINHEIT | Preis | ANZAHL | Favoriten | |
GnRHR Double Nickase Plasmid (h) | sc-401783-NIC | 20 µg | $410.00 | |||
GnRHR Double Nickase Plasmid (h2) | sc-401783-NIC-2 | 20 µg | $410.00 |
GNRHR kodiert den menschlichen Gonadotropin-Releasing-Hormon-Rezeptor (GnRHR), einen rhodopsinähnlichen, G‑Protein-gekoppelten Rezeptor, der vorwiegend in gonadotropen Zellen der Hypophyse exprimiert wird. Nach Bindung des hypothalamischen GnRH koppelt GnRHR hauptsächlich an Gαq/11 und aktiviert dadurch die Phospholipase Cβ, was die IP3/DAG-Signalübertragung, die Mobilisierung von intrazellulärem Ca2+ sowie die Aktivität der PKC/MAPK-Signalwege erhöht und so die Transkription und Sekretion von luteinisierendem Hormon und follikelstimulierendem Hormon reguliert. Diese Signalkaskade integriert pulsatile endokrine Signale zur Steuerung der reproduktiven Entwicklung und Fertilität; Störungen der GNRHR-Funktion sind mit Erkrankungen der Hypothalamus-Hypophysen-Gonaden-Achse wie dem kongenitalen hypogonadotropen Hypogonadismus und verwandten reproduktiv-endokrinen Phänotypen assoziiert. In zellulären Modellen stellt GnRHR zudem einen gut zugänglichen Ansatzpunkt dar, um GPCR-Desensibilisierung, β‑Arrestin-abhängiges Trafficking und die Dekodierung von Stimulusfrequenzen zu untersuchen.
GnRHR Das Double-Nickase-Plasmid (h) besteht aus einem aufeinander abgestimmten Plasmidpaar, das für die hochspezifische Bearbeitung des GNRHR-Lokus in human-Zelllinien entwickelt wurde. Jedes Plasmid exprimiert eine Cas9-D10A-Nickase und eine spezifische sgRNA, die auf entgegengesetzte DNA-Stränge innerhalb von GNRHR abzielt. Wenn sie auf benachbarte Stellen auf entgegengesetzten DNA-Strängen gerichtet sind, erzeugen die beiden Nickasen versetzte Einzelstrang-Schnitte, die zusammen einen versetzten Doppelstrangbruch erzeugen, was eine koordinierte On-Target-Aktivität beider Guides erfordert. Der resultierende DNA-Bruch wird durch endogene zelluläre Reparaturwege behoben, meist durch nicht-homologe Endverknüpfung (NHEJ), was zu Insertionen oder Deletionen führt, die die GNRHR-Funktion stören. Durch die Notwendigkeit einer doppelten sgRNA-Bindung am Zielort erhöht der Doppel-Nick-Ansatz die Spezifität der Bearbeitung und bietet eine komplementäre CRISPR-Strategie für Anwendungen, bei denen eine zusätzliche Kontrolle über die Zielgenauigkeit gewünscht ist.
Um eine effiziente Identifizierung editierter Zellen zu unterstützen, kodiert ein Plasmid GFP zur fluoreszierenden Visualisierung transfizierter Populationen, während das Begleitplasmid ein Puromycin-Resistenzgen für die Antibiotika-Selektion trägt. Zusammen unterstützen diese Merkmale eine effiziente Anreicherung co-transfizierter Populationen und vereinfachen die Validierung von Klonen mit GNRHR-Störung.
Nur für Forschungszwecke. Nicht für diagnostische oder therapeutische Zwecke bestimmt.