GM2/GD2 synthase Plásmido CRISPR/Cas9 KO (m): sc-420474

Descripción general

B4galnt1 codifica la sintasa de GM2/GD2, una glicosiltransferasa localizada en el aparato de Golgi que transfiere N-acetilgalactosamina a precursores de gangliósidos para generar GM2 y GD2, modulando la composición de los glicoesfingolípidos en las membranas celulares. Al controlar la abundancia de gangliósidos, influye en la organización de las balsas lipídicas, las interacciones célula–célula y los procesos de señalización importantes para el desarrollo neuronal y la función sináptica. En tejidos de ratón, la actividad de B4galnt1 contribuye a los patrones de glicolípidos asociados a la mielina y a la homeostasis neuroinmunitaria mediante la regulación de eventos de reconocimiento mediados por glicolípidos. La desregulación de la biosíntesis de gangliósidos se asocia a fenotipos neurológicos y a cambios en el paisaje de antígenos de la superficie celular, lo que convierte a B4galnt1 en una diana clave para estudios mecanísticos en neurobiología y biología de membranas.

El plásmido CRISPR/Cas9 KO GM2/GD2 synthase (m) es un conjunto de plásmidos diseñado para la interrupción dirigida del gen B4galnt1 en líneas celulares mouse. Cada plásmido coexpresa un ARN guía único (sgRNA) dirigido a un sitio distinto dentro del B4galnt1 junto con la nucleasa Cas9 de Streptococcus pyogenes. Los plásmidos también codifican GFP, lo que permite la identificación fluorescente y el enriquecimiento de las células transfectadas con éxito mediante microscopía de fluorescencia o citometría de flujo.

El diseño multiguía aumenta la probabilidad de generar inserciones o deleciones (indeles) que interrumpan el marco de lectura abierto de B4galnt1 tras la formación de roturas de doble cadena mediadas por Cas9. Las roturas de ADN introducidas por el sistema CRISPR/Cas9 se reparan a través de vías endógenas de unión de extremos no homólogos (NHEJ), lo que con frecuencia da lugar a mutaciones de desplazamiento del marco de lectura que anulan la expresión de la proteína GM2/GD2 synthase.

Este sistema de knockout CRISPR permite la generación eficiente de modelos celulares deficientes en B4galnt1 para la investigación de la señalización de GM2/GD2 synthase, estudios de genómica funcional, investigación en biología del cáncer y evaluación de respuestas terapéuticas en líneas celulares humanas.

Características principales

• sgRNA dirigidos a los exones de B4galnt1 críticos para la función de GM2/GD2 synthase
  Coexpresión de SpCas9 y sgRNA a partir de un único plásmido para simplificar la administración
  Reportero GFP para la identificación de células transfectadas
  Conjunto de plásmidos dirigidos a múltiples sitios genómicos de B4galnt1 para mejorar la eficiencia del knockout
  Compatible con la administración mediante transfección

Variantes de diseño

CRISPRs +/- HDRs

• Los gRNA codificados por el plásmido GM2/GD2 synthase CRISPR/Cas9 KO (m) y el plásmido GM2/GD2 synthase CRISPR/Cas9 KO (m2) se dirigen a sitios distintos dentro del locus B4galnt1. Puede estar disponible uno o ambos diseños de orientación. Consulte «Productos relacionados» para conocer la disponibilidad.
  Las construcciones donantes HDR codificadas por el plásmido HDR GM2/GD2 synthase (m) y el plásmido HDR GM2/GD2 synthase (m2) contienen un casete de resistencia a la puromicina y un reportero RFP flanqueado por brazos de homología B4galnt1 para facilitar la reparación dirigida por homología en sitios diana B4galnt1 definidos que se corresponden con los diseños de KO de CRISPR/Cas9. La disponibilidad de los donantes HDR puede variar. Consulte «Productos relacionados» para conocer la disponibilidad.

Sólo para uso en investigación. No destinado a uso diagnóstico o terapéutico.