GlyR α4 CRISPR Activation Plasmid (h): sc-416048-ACT

GLRA4 kodiert die Glycinrezeptor‑Untereinheit Alpha 4 (GlyR α4), eine ligandenabhängige Chloridkanal‑Untereinheit, die zur schnellen inhibitorischen Neurotransmission im zentralen Nervensystem beiträgt, indem sie eine glycinabhängige Hyperpolarisation vermittelt. GlyR‑Komplexe regulieren die neuronale Erregbarkeit und die Synchronisation von Netzwerken über die Chloridleitfähigkeit sowie durch Crosstalk mit anderen inhibitorischen Signalwegen, einschließlich der GABAergen Signalübertragung. Obwohl GLRA4 weniger gut charakterisiert ist als andere Mitglieder der GLRA‑Familie, ist die Biologie glycinerg vermittelter Rezeptoren generell mit der motorischen Kontrolle, der Schreckreaktions‑Schaltkreisfunktion und dem synaptischen inhibitorischen Gleichgewicht verknüpft – Prozesse, die häufig mit neuroentwicklungsbezogenen und neuropsychiatrischen Phänotypen in Zusammenhang gebracht werden. Die Untersuchung von GLRA4 unterstützt mechanistische Arbeiten zur Rezeptorassemblierung, Synapsenfunktion und zu Veränderungen der inhibitorischen Signalübertragung, die für Erkrankungen des Nervensystems relevant sind, ohne klinische Ergebnisse zu implizieren.

GlyR α4 Das CRISPR-Aktivierungsplasmid (h) bietet einen gezielten, nicht-destruktiven Ansatz zur Hochregulierung der endogenen GLRA4-Expression, ohne die zugrunde liegende DNA-Sequenz zu verändern.

GlyR α4 Das CRISPR-Aktivierungsplasmid (h) ist ein aus drei Plasmiden bestehendes synergistisches Aktivierungsmediator-System (SAM), das für eine hocheffiziente, ortsspezifische transkriptionelle Hochregulation des GLRA4-Lokus in menschlichen Zelllinien entwickelt wurde. Das System basiert auf einem katalytisch inaktiven Cas9 (dCas9), das zwei inaktivierende Mutationen (D10A und N863A) trägt, welche die Nukleaseaktivität eliminieren, während die DNA-Bindung erhalten bleibt. Dieses dCas9 ist mit VP64, einem potenten Transkriptionsaktivator, fusioniert und wird zusammen mit einem Blasticidin-Resistenzgen zur Selektion koexprimiert. Das zweite Plasmid kodiert das MS2-p65-HSF1-Fusionsprotein, einen sekundären Aktivatorkomplex, der zusammen mit dCas9-VP64 wirkt, sowie ein Hygromycin-Resistenzgen. Das dritte Plasmid kodiert für eine zielspezifische 20-nt-sgRNA, die an zwei MS2-RNA-Aptamere fusioniert ist, welche den MS2-p65-HSF1-Komplex an die Aktivierungsstelle rekrutieren, begleitet von einem Puromycin-Resistenzgen. Die drei Plasmide werden im Massenverhältnis 1:1:1 verabreicht, um eine ausgewogene Expression aller Systemkomponenten zu gewährleisten.

Nach der Assemblierung am Zielort bindet der SAM-Komplex etwa 200 bp stromaufwärts der GLRA4-Transkriptionsstartstelle, wo VP64, p65 und HSF1 gemeinsam die Transkriptionsmaschinerie rekrutieren und die Hochregulation der endogenen GlyR α4-Expression vorantreiben. Im Gegensatz zu nukleaseaktivem Cas9 verursacht dCas9 keine Doppelstrangbrüche und verändert die genomische Sequenz nicht, wodurch der native GLRA4-Locus erhalten bleibt und die Untersuchung von GlyR α4-abhängigen Transkriptionsreaktionen am endogenen Locus ermöglicht wird. Dies macht es zu einem wertvollen Werkzeug für Funktionsstudien, die Identifizierung von Zielgenen und die Modellierung der Wiederherstellung des GlyR α4-Signalwegs in Tumorzellen mit stillgelegtem oder reduziertem GLRA4-Ausdruck.

Nur für Forschungszwecke. Nicht für diagnostische oder therapeutische Zwecke bestimmt.