Plásmido Doble Nickase (h) GlyR α2: sc-402179-NIC

GLRA2 codifica la subunidad alfa-2 del receptor de glicina (GlyR α2), un canal de cloruro activado por ligando de la familia de receptores Cys-loop que media la neurotransmisión inhibitoria rápida en el sistema nervioso central. GlyR α2 contribuye a la señalización glicinérgica sináptica y extrasináptica que modula la excitabilidad neuronal, la sincronización de redes y el equilibrio entre excitación e inhibición mediante la conductancia de cloruro. Este receptor participa en procesos del neurodesarrollo, incluida la maduración de sinapsis y el refinamiento de circuitos, y su función se intersecta con vías que regulan la transmisión sináptica inhibitoria y la homeostasis iónica. La señalización glicinérgica alterada y los cambios en la secuencia o en la expresión de GLRA2 se han vinculado, en estudios genéticos y funcionales, con fenotipos del neurodesarrollo y con trastornos relacionados con crisis epilépticas o de hiperexcitabilidad, lo que respalda su relevancia para la investigación mecanística en neurociencia.

GlyR α2 El plásmido de doble nicasa (h) consiste en un par de plásmidos emparejados diseñados para la edición de alta especificidad del locus GLRA2 en líneas celulares human. Cada plásmido expresa una nicasa Cas9 D10A y un ARN guía específico (sgRNA) dirigido a cadenas de ADN opuestas dentro de GLRA2. Cuando se dirigen a sitios adyacentes en cadenas de ADN opuestas, las dos nicasas generan cortes en cadena simple desplazados que, juntos, producen una rotura de doble cadena escalonada, lo que requiere una actividad coordinada sobre el objetivo por parte de ambas guías. La rotura de ADN resultante se resuelve mediante vías de reparación celular endógenas, más comúnmente a través de la unión de extremos no homólogos (NHEJ), lo que da lugar a inserciones o deleciones que alteran la función de GLRA2. Al requerir la participación de dos ARN guía en el locus diana, el enfoque de doble corte mejora la especificidad de la edición y proporciona una estrategia CRISPR complementaria para aplicaciones en las que se desea un control adicional sobre la precisión de la orientación.

Para facilitar la identificación eficiente de las células editadas, un plásmido codifica GFP para la visualización fluorescente de las poblaciones transfectadas, mientras que el plásmido complementario lleva un gen de resistencia a la puromicina para la selección con antibióticos. En conjunto, estas características facilitan el enriquecimiento eficiente de las poblaciones cotransfectadas y simplifican la validación de los clones con GLRA2 alterado.

Sólo para uso en investigación. No destinado a uso diagnóstico o terapéutico.