Glutathione reductase CRISPR/Cas9 KO Plasmid (h): sc-417499

Übersicht

GSR kodiert die humane Glutathion-Reduktase, eine FAD-abhängige Oxidoreduktase, die unter Verwendung von NADPH reduziertes Glutathion (GSH) aus oxidiertem Glutathion (GSSG) regeneriert und damit die intrazelluläre Redoxhomöostase aufrechterhält. Durch die Sicherung des GSH-Pools unterstützt GSR die Entgiftung reaktiver Sauerstoffspezies, bewahrt den Thiol-Status von Proteinen und moduliert redoxsensitives Signaling in zytosolischen und mitochondrialen Kompartimenten. Diese Aktivität ist mit NADPH-bildenden Stoffwechselwegen wie dem Pentosephosphatweg verknüpft und trägt zu zellulären Abwehrmechanismen bei oxidativem, metabolischem und inflammatorischem Stress bei. Veränderungen der GSR-Funktion oder -Expression werden häufig im Kontext von Redox-Ungleichgewichten untersucht, darunter hämolytische Phänotypen, neurodegenerative Prozesse und die Anpassung von Krebszellen an oxidativen Stress.

Das Glutathione reductase CRISPR/Cas9-KO-Plasmid (h) ist ein Pool von Plasmiden, die für die gezielte Disruption des GSR-Gens in human-Zelllinien entwickelt wurden. Jedes Plasmid koexprimiert eine einzigartige Single-Guide-RNA (sgRNA), die auf eine bestimmte Stelle innerhalb des GSR-Gens abzielt, zusammen mit der Streptococcus pyogenes Cas9-Nuklease. Die Plasmide kodieren zudem für GFP, was die fluoreszente Identifizierung und Anreicherung erfolgreich transfizierter Zellen mittels Fluoreszenzmikroskopie oder Durchflusszytometrie ermöglicht.

Das Multi-Guide-Design erhöht die Wahrscheinlichkeit, dass Insertionen oder Deletionen (Indels) entstehen, die den offenen Leserahmen von GSR nach der Cas9-vermittelten Bildung von Doppelstrangbrüchen unterbrechen. Durch das CRISPR/Cas9-System verursachte DNA-Brüche werden über endogene NHEJ-Wege (Non-Homologous End Joining) repariert, was häufig zu Frameshift-Mutationen führt, die die Glutathione reductase-Proteinexpression aufheben.

Dieses CRISPR-Knockout-System ermöglicht die effiziente Erzeugung von GSR-defizienten Zellmodellen zur Untersuchung der Glutathione reductase-Signalübertragung, für funktionelle Genomstudien, in der Krebsbiologieforschung sowie zur Bewertung therapeutischer Reaktionen in menschlichen Zelllinien.

Hauptmerkmale

• sgRNAs, die auf GSR-Exone abzielen, die für die Glutathione reductase-Funktion entscheidend sind
  Ko-Expression von SpCas9 und sgRNA aus einem einzigen Plasmid zur vereinfachten Verabreichung
  GFP-Reporter zur Identifizierung transfizierter Zellen
  Pool von Plasmiden, die auf mehrere GSR-Genomstellen abzielen, um die Knockout-Effizienz zu verbessern
  Kompatibel mit der Verabreichung durch Transfektion

Designvarianten

CRISPRs +/- HDRs

• gRNAs, die vom Glutathione reductase CRISPR/Cas9-KO-Plasmid (h) und vom Glutathione reductase CRISPR/Cas9-KO-Plasmid (h2) kodiert werden, zielen auf unterschiedliche Stellen innerhalb des GSR-Lokus ab. Es kann ein oder beide Targeting-Designs verfügbar sein. Siehe „Verwandte Produkte“ für Verfügbarkeit.
  HDR-Donorkonstrukte, kodiert durch das Glutathione reductase HDR-Plasmid (h) und Glutathione reductase HDR-Plasmid (h2) kodiert, enthalten eine Puromycin-Resistenzkassette und einen RFP-Reporter, flankiert von GSR-Homologiearmen, um die homologe Reparatur an definierten GSR-Zielstellen entsprechend den CRISPR/Cas9-KO-Designs zu unterstützen. Die Verfügbarkeit von HDR-Donoren kann variieren. Siehe „Verwandte Produkte“ für Verfügbarkeit.

Nur für Forschungszwecke. Nicht für diagnostische oder therapeutische Zwecke bestimmt.