Plasmide CRISPR d'Activation (h) GluR-5: sc-402475-ACT

GRIK1 code la sous-unité GluR-5 (GluK1) du récepteur ionotrope du glutamate de type kaïnate, un canal cationique activé par un ligand qui contribue à la neurotransmission excitatrice rapide dans le système nerveux central. Les récepteurs contenant GluR-5 modulent la force synaptique et l’excitabilité neuronale via des flux de sodium et de calcium, façonnant l’activité et la plasticité des réseaux dans des voies impliquées dans l’apprentissage, le traitement sensoriel et la signalisation de la douleur. L’activité du récepteur interagit avec des cascades de signalisation dépendantes du calcium et des programmes transcriptionnels régulés par l’activité qui influencent le développement et le remodelage des synapses. Une dérégulation de la signalisation des récepteurs kaïnates et de l’expression de GRIK1 a été associée à des phénotypes neuropsychiatriques et neurologiques, ce qui étaye son utilisation comme cible mécanistique pour étudier l’équilibre excitation/inhibition et les dysfonctionnements des circuits.

GluR-5 Le plasmide d'activation CRISPR (h) offre une approche ciblée et non destructive pour réguler à la hausse l'expression endogène de GRIK1 sans modifier la séquence d'ADN sous-jacente.

GluR-5 Le plasmide d'activation CRISPR (h) est un système SAM (synergistic activation mediator) à trois plasmides conçu pour une régulation à la hausse hautement efficace et spécifique du locus GRIK1 dans des lignées cellulaires humaines. Le système s'articule autour d'une Cas9 catalytiquement inactive (dCas9) portant deux mutations inactivantes (D10A et N863A) qui éliminent l'activité nucléase tout en préservant la liaison à l'ADN. Cette dCas9 est fusionnée à VP64, un puissant activateur transcriptionnel, et est co-exprimée avec un gène de résistance à la blasticidine pour la sélection. Le deuxième plasmide code pour la protéine de fusion MS2-p65-HSF1, un complexe activateur secondaire qui agit de concert avec dCas9-VP64, ainsi qu'un gène de résistance à l'hygromycine. Le troisième plasmide code pour un ARN guide (sgRNA) de 20 nt spécifique de la cible, fusionné à deux aptamères d'ARN MS2 qui recrutent le complexe MS2-p65-HSF1 vers le site d'activation, accompagné d'un gène de résistance à la puromycine. Les trois plasmides sont délivrés dans un rapport massique de 1:1:1 pour une expression équilibrée de tous les composants du système.

Une fois assemblé au locus cible, le complexe SAM se lie à environ 200 pb en amont du site de départ de la transcription GRIK1, où VP64, p65 et HSF1 agissent de concert pour recruter la machinerie transcriptionnelle et induire une régulation à la hausse de l'expression endogène de GluR-5. Contrairement à Cas9, qui possède une activité nucléase, dCas9 n'introduit pas de cassures double brin ni ne modifie la séquence génomique, préservant ainsi le locus GRIK1 natif et permettant l'étude des réponses transcriptionnelles dépendantes de GluR-5 au niveau du locus endogène, ce qui en fait un outil précieux pour les études fonctionnelles, l'identification de gènes cibles et la modélisation de la restauration de la voie GluR-5 dans les cellules tumorales présentant une expression de GRIK1 silencée ou réduite.

Réservé à la recherche. N'est pas destiné à un usage diagnostique ou thérapeutique.