Glucosidase IIα Double Nickase Plasmid (h): sc-407683-NIC
- Zielspezies: human
- 20 µg transfektionsfertige, aufgereinigte Plasmid DNA; geeignet für 20 Transfektionen
- Das Glucosidase IIα Double Nickase Plasmid (h) wird als Plasmid-Paar geliefert. Die einzelnen Plasmide kodieren für eine D10A mutierte Cas9 Nuklease sowie für je eine unterschiedliche, zielspezifische 20nt guide RNA (gRNA) Sequenz. Dies erlaubt eine hohe Knockout-Effizienz bei gleichzeitig größerer Spezifität als das entsprechende CRISPR/Cas9 KO Plasmid
- gRNA Sequenzpaare liegen ca. 20 bp auseinander um ein spezifisches Cas9-vermitteltes "Double Nicking" der genomischen DNA zu erlauben und so im Resultat den Effekt eines Doppelstrangbruchs nachzuahmen.
- Ein Plasmid kodiert für ein Puromycin-Resistenzgen zur Selektion von stabilen Knockout-Zellen. Das andere Plasmid kodiert für ein GFP-Gen für den visuellen Nachweis der Transfektion
- Glucosidase IIα Double-Nickase-Plasmid (h) und Glucosidase IIα Double-Nickase-Plasmid (h2) kodieren unterschiedliche gepaarte gRNA-Designs, die auf GANAB abzielen. Möglicherweise ist eines oder sind beide Designs verfügbar
- Nach der Transfektion kann die Effizienz des Gen-Knockouts per Western Blot oder histologisch mit folgendem Antikörper überprüft werden: Glucosidase IIα: sc-518226
Bestellinformation
| Produkt | Katalog # | EINHEIT | Preis | ANZAHL | Favoriten | |
Glucosidase IIα Double Nickase Plasmid (h) | sc-407683-NIC | 20 µg | $410.00 | |||
Glucosidase IIα Double Nickase Plasmid (h2) | sc-407683-NIC-2 | 20 µg | $410.00 |
GANAB kodiert die Alpha‑Untereinheit der Glucosidase II, eines im ER lokalisierten Enzyms, das an neu entstehenden Glykoproteinen schrittweise Glukosereste von N‑verknüpften Glykanen entfernt. Dieser Deglukosylierungsschritt ist zentral für die Qualitätskontrolle im ER, indem er die Glykanprozessierung mit der durch Calnexin/Calreticulin unterstützten Faltung koppelt und dauerhaft fehlgefaltete Proteine dem ER‑assoziierten Abbau zuführt. Über diese Prozesse beeinflusst GANAB die Proteostase im sekretorischen Weg, die Signalgebung der Unfolded‑Protein‑Response und die Reifung vieler Membran‑ und sekretierter Proteine. Genetische und funktionelle Störungen von GANAB wurden mit Erkrankungen der Glykoproteinprozessierung in Verbindung gebracht und im Kontext von Mechanismen der polyzystischen Nieren‑ und Lebererkrankung sowie allgemeinerer, ER‑Stress‑assoziierter Phänotypen untersucht.
Glucosidase IIα Das Double-Nickase-Plasmid (h) besteht aus einem aufeinander abgestimmten Plasmidpaar, das für die hochspezifische Bearbeitung des GANAB-Lokus in human-Zelllinien entwickelt wurde. Jedes Plasmid exprimiert eine Cas9-D10A-Nickase und eine spezifische sgRNA, die auf entgegengesetzte DNA-Stränge innerhalb von GANAB abzielt. Wenn sie auf benachbarte Stellen auf entgegengesetzten DNA-Strängen gerichtet sind, erzeugen die beiden Nickasen versetzte Einzelstrang-Schnitte, die zusammen einen versetzten Doppelstrangbruch erzeugen, was eine koordinierte On-Target-Aktivität beider Guides erfordert. Der resultierende DNA-Bruch wird durch endogene zelluläre Reparaturwege behoben, meist durch nicht-homologe Endverknüpfung (NHEJ), was zu Insertionen oder Deletionen führt, die die GANAB-Funktion stören. Durch die Notwendigkeit einer doppelten sgRNA-Bindung am Zielort erhöht der Doppel-Nick-Ansatz die Spezifität der Bearbeitung und bietet eine komplementäre CRISPR-Strategie für Anwendungen, bei denen eine zusätzliche Kontrolle über die Zielgenauigkeit gewünscht ist.
Um eine effiziente Identifizierung editierter Zellen zu unterstützen, kodiert ein Plasmid GFP zur fluoreszierenden Visualisierung transfizierter Populationen, während das Begleitplasmid ein Puromycin-Resistenzgen für die Antibiotika-Selektion trägt. Zusammen unterstützen diese Merkmale eine effiziente Anreicherung co-transfizierter Populationen und vereinfachen die Validierung von Klonen mit GANAB-Störung.
Nur für Forschungszwecke. Nicht für diagnostische oder therapeutische Zwecke bestimmt.