Plasmide Double Nickase (h) Glucosidase IIα: sc-407683-NIC
- Espèces cibles: human
- 20 µg d'ADN plasmidique purifié et prêt à transfecter; Jusqu'à 20 transfections
- Le Plasmide Double Nickase (h) Glucosidase IIα correspond à une paire de plasmides chacun codant la nucléase Cas9 mutante D10A et un ARN guide (gARN) cible de 20 nt specifique, élaboré pour le knockout optimal de l'expression d'un gène avec une plus grande spécificité que le plasmide KO CRISPR/Cas9 correspondant.
- Les séquences des paires d'ARNg sont décalées de 20 pb environ pour induire avec la Cas9 une double entaille spécifique de l'ADN génomique, qui imite un DSB
- L'un des plasmides de la paire contient un gène de résistance à la puromycine; l'autre plasmide de la paire contient un marqueur GFP pour confirmer visuellement la transfection
- Le plasmide Glucosidase IIα Double Nickase (h) et le plasmide Glucosidase IIα Double Nickase (h2) codent pour des paires distinctes de gRNA ciblant GANAB. Un ou les deux modèles peuvent être disponibles
- Après transfection, l'efficacité de knockout de gène peut être évaluée par WB, IF ou IHC en utilisant l'anticorps: Glucosidase IIα Antibody (D-1): sc-518226
Informations pour la commande
| Nom du produit | Ref. Catalogue | COND. | Prix HT | QTÉ | Favoris | |
Plasmide Double Nickase (h) Glucosidase IIα | sc-407683-NIC | 20 µg | $410.00 | |||
Plasmide Double Nickase (h2) Glucosidase IIα | sc-407683-NIC-2 | 20 µg | $410.00 |
GANAB code la sous-unité alpha de la glucosidase II, une enzyme résidente du réticulum endoplasmique (RE) qui enlève de manière séquentielle des résidus de glucose des N-glycanes liés aux protéines glycosylées naissantes. Cette étape de déglucosylation est au cœur du contrôle qualité du RE : elle couple le traitement des glycannes au repliement assisté par la calnexine/la calréticuline et oriente les protéines durablement mal repliées vers la dégradation associée au RE (ERAD). Par ces processus, GANAB influence la protéostasie de la voie sécrétoire, la signalisation de la réponse aux protéines mal conformées (UPR) et la maturation de nombreuses protéines membranaires et sécrétées. Des perturbations génétiques et fonctionnelles de GANAB ont été associées à des troubles du traitement des glycoprotéines et ont été étudiées dans le contexte des mécanismes de la polykystose rénale et hépatique ainsi que de phénotypes plus larges liés au stress du RE.
Glucosidase IIα Le plasmide double nickase (h) se compose d'une paire de plasmides appariés, conçus pour une édition hautement spécifique du locus GANAB dans les lignées cellulaires human. Chaque plasmide exprime une nickase Cas9 D10A et un sgRNA distinct ciblant des brins d'ADN opposés au sein de GANAB. Lorsqu'elles sont dirigées vers des sites adjacents sur des brins d'ADN opposés, les deux nickases génèrent des cassures simple brin décalées qui, ensemble, produisent une cassure double brin décalée, nécessitant une activité coordonnée sur la cible de la part des deux guides. La cassure d'ADN qui en résulte est résolue par les voies de réparation cellulaires endogènes, le plus souvent par jonction non homologue (NHEJ), ce qui conduit à des insertions ou des délétions qui perturbent la fonction de GANAB. En nécessitant l'engagement de deux ARNsg au locus cible, l'approche par double nick améliore la spécificité de l'édition et offre une stratégie CRISPR complémentaire pour les applications où un contrôle supplémentaire de la précision du ciblage est souhaité.
Afin de faciliter l'identification efficace des cellules éditées, un plasmide code pour la GFP permettant la visualisation par fluorescence des populations transfectées, tandis que le plasmide compagnon porte un gène de résistance à la puromycine pour la sélection antibiotique. Ensemble, ces caractéristiques favorisent l'enrichissement efficace des populations co-transfectées et simplifient la validation des clones présentant une perturbation de GANAB.
Réservé à la recherche. N'est pas destiné à un usage diagnostique ou thérapeutique.