Glucosidase I Double Nickase Plasmid (h): sc-405014-NIC
- Zielspezies: human
- 20 µg transfektionsfertige, aufgereinigte Plasmid DNA; geeignet für 20 Transfektionen
- Das Glucosidase I Double Nickase Plasmid (h) wird als Plasmid-Paar geliefert. Die einzelnen Plasmide kodieren für eine D10A mutierte Cas9 Nuklease sowie für je eine unterschiedliche, zielspezifische 20nt guide RNA (gRNA) Sequenz. Dies erlaubt eine hohe Knockout-Effizienz bei gleichzeitig größerer Spezifität als das entsprechende CRISPR/Cas9 KO Plasmid
- gRNA Sequenzpaare liegen ca. 20 bp auseinander um ein spezifisches Cas9-vermitteltes "Double Nicking" der genomischen DNA zu erlauben und so im Resultat den Effekt eines Doppelstrangbruchs nachzuahmen.
- Ein Plasmid kodiert für ein Puromycin-Resistenzgen zur Selektion von stabilen Knockout-Zellen. Das andere Plasmid kodiert für ein GFP-Gen für den visuellen Nachweis der Transfektion
- Glucosidase I Double-Nickase-Plasmid (h) und Glucosidase I Double-Nickase-Plasmid (h2) kodieren unterschiedliche gepaarte gRNA-Designs, die auf MOGS abzielen. Möglicherweise ist eines oder sind beide Designs verfügbar
- Nach der Transfektion kann die Effizienz des Gen-Knockouts per Western Blot oder histologisch mit folgendem Antikörper überprüft werden: Glucosidase I: sc-374006
Bestellinformation
| Produkt | Katalog # | EINHEIT | Preis | ANZAHL | Favoriten | |
Glucosidase I Double Nickase Plasmid (h) | sc-405014-NIC | 20 µg | $410.00 | |||
Glucosidase I Double Nickase Plasmid (h2) | sc-405014-NIC-2 | 20 µg | $410.00 |
Das humane MOGS-Gen kodiert die Glukosidase I, eine mit der Membran des endoplasmatischen Retikulums (ER) assoziierte α-Glukosidase, die den ersten Glukose-Trimmungsschritt der N‑gebundenen Glykanverarbeitung an neu synthetisierten Glykoproteinen katalysiert. Dieses frühe Deglukosylierungsereignis unterstützt die Faltung von Glykoproteinen und ER-Qualitätskontrollzyklen unter Beteiligung von Calnexin/Calreticulin und beeinflusst damit die Proteinreifung sowie den Durchsatz im sekretorischen Transportweg. Indem die MOGS-Aktivität glykanabhängiges Trafficking und die Stabilität membranständiger und sekretierter Proteine mitprägt, überschneidet sie sich mit der Proteostase, ER-Stressantworten und Wirt–Pathogen-Interaktionen, die von Glycosylierung abhängen. Eine genetische Störung oder veränderte Funktion von MOGS wurde mit Phänotypen im Zusammenhang mit kongenitalen Glykosylierungsstörungen in Verbindung gebracht und ist für mechanistische Studien der Glykoprotein-Biogenese in menschlichen Zellen relevant.
Glucosidase I Das Double-Nickase-Plasmid (h) besteht aus einem aufeinander abgestimmten Plasmidpaar, das für die hochspezifische Bearbeitung des MOGS-Lokus in human-Zelllinien entwickelt wurde. Jedes Plasmid exprimiert eine Cas9-D10A-Nickase und eine spezifische sgRNA, die auf entgegengesetzte DNA-Stränge innerhalb von MOGS abzielt. Wenn sie auf benachbarte Stellen auf entgegengesetzten DNA-Strängen gerichtet sind, erzeugen die beiden Nickasen versetzte Einzelstrang-Schnitte, die zusammen einen versetzten Doppelstrangbruch erzeugen, was eine koordinierte On-Target-Aktivität beider Guides erfordert. Der resultierende DNA-Bruch wird durch endogene zelluläre Reparaturwege behoben, meist durch nicht-homologe Endverknüpfung (NHEJ), was zu Insertionen oder Deletionen führt, die die MOGS-Funktion stören. Durch die Notwendigkeit einer doppelten sgRNA-Bindung am Zielort erhöht der Doppel-Nick-Ansatz die Spezifität der Bearbeitung und bietet eine komplementäre CRISPR-Strategie für Anwendungen, bei denen eine zusätzliche Kontrolle über die Zielgenauigkeit gewünscht ist.
Um eine effiziente Identifizierung editierter Zellen zu unterstützen, kodiert ein Plasmid GFP zur fluoreszierenden Visualisierung transfizierter Populationen, während das Begleitplasmid ein Puromycin-Resistenzgen für die Antibiotika-Selektion trägt. Zusammen unterstützen diese Merkmale eine effiziente Anreicherung co-transfizierter Populationen und vereinfachen die Validierung von Klonen mit MOGS-Störung.
Nur für Forschungszwecke. Nicht für diagnostische oder therapeutische Zwecke bestimmt.