Plásmido CRISPR de Activación (h2) GLT6D1: sc-415678-ACT-2

El GLT6D1 humano (glycosyltransferase 6 domain containing 1) codifica una glicosiltransferasa putativa residente en el aparato de Golgi, implicada en la biosíntesis y la remodelación de glicoconjugados, influyendo así en la glicosilación de proteínas y en la composición de carbohidratos de la superficie celular. A través de sus efectos sobre la maduración de los glicanos, GLT6D1 está en posición de modular el tráfico de la vía secretora, las interacciones con la matriz extracelular y los procesos de señalización mediada por receptores que dependen de patrones específicos de glicosilación. La variación genética y la regulación alterada de GLT6D1 se han asociado en estudios en humanos con la susceptibilidad a la enfermedad periodontal, lo que resalta su relevancia en las interacciones huésped–microbio y en la remodelación tisular inflamatoria en la cavidad oral. Las herramientas de edición génica y genómica funcional dirigidas a GLT6D1 permiten investigar fenotipos dependientes de la glicosilación, incluidos cambios en la adhesión celular, la señalización relacionada con la inmunidad y los perfiles glicoproteómicos en modelos celulares relevantes para la enfermedad.

GLT6D1 El plásmido de activación CRISPR (h2) proporciona un enfoque específico y no destructivo para regular al alza la expresión endógena de GLT6D1 sin alterar la secuencia de ADN subyacente.

GLT6D1 El plásmido de activación CRISPR (h2) es un sistema mediador de activación sinérgica (SAM) de tres plásmidos diseñado para la regulación al alza transcripcional altamente eficiente y específica del locus GLT6D1 en líneas celulares humanas. El sistema se basa en una Cas9 catalíticamente inactiva (dCas9) que porta dos mutaciones inactivadoras (D10A y N863A) que eliminan la actividad nucleasa al tiempo que conservan la unión al ADN. Esta dCas9 se fusiona con VP64, un potente activador transcripcional, y se coexpresa con un gen de resistencia a la blasticidina para la selección. El segundo plásmido codifica la proteína de fusión MS2-p65-HSF1, un complejo activador secundario que actúa en conjunto con dCas9-VP64, junto con un gen de resistencia a la higromicina. El tercer plásmido codifica un ARN guía (sgRNA) específico del objetivo de 20 nt fusionado a dos aptámeros de ARN MS2 que reclutan el complejo MS2-p65-HSF1 al sitio de activación, acompañado de un gen de resistencia a la puromicina. Los tres plásmidos se administran en una proporción de masa de 1:1:1 para una expresión equilibrada de todos los componentes del sistema.

Una vez ensamblado en el locus diana, el complejo SAM se une aproximadamente 200 pb aguas arriba del sitio de inicio transcripcional GLT6D1, donde VP64, p65 y HSF1 actúan de forma coordinada para reclutar la maquinaria transcripcional e impulsar la regulación al alza de la expresión endógena de GLT6D1. A diferencia de la Cas9 con actividad nucleasa, dCas9 no introduce roturas de doble cadena ni modifica la secuencia genómica, preservando el locus nativo GLT6D1 y permitiendo el estudio de las respuestas transcripcionales dependientes de GLT6D1 en el locus endógeno, lo que la convierte en una herramienta valiosa para estudios funcionales, la identificación de genes diana y la modelización de la restauración de la vía GLT6D1 en células tumorales con expresión de GLT6D1 silenciada o reducida.

Sólo para uso en investigación. No destinado a uso diagnóstico o terapéutico.