GLT25D1 CRISPR/Cas9 KO Plasmid (h): sc-405631

Übersicht

COLGALT1 kodiert GLT25D1, eine im endoplasmatischen Retikulum lokalisierte Kollagen-β(1-O)-Galactosyltransferase, die während der posttranslationalen Modifikation von Kollagen die Galactosylierung von Hydroxylysinresten katalysiert. Diese Reaktion ist Teil eines sequenziellen Glykosylierungswegs, der die korrekte Faltung, Stabilität und Sekretion von Kollagen unterstützt und damit den Aufbau der extrazellulären Matrix sowie die Organisation der Basalmembran beeinflusst. Die Aktivität von GLT25D1 ist mit der Proteostase im ER und dem sekretorischen Transport verknüpft; eine veränderte Kollagenglykosylierung kann die Matrix-Zell-Signalgebung und die Gewebemechanik stören. Genetische Störungen oder Fehlregulationen von Enzymen der Kollagenglykosylierung, einschließlich COLGALT1, wurden mit Bindegewebs- und Entwicklungsphänotypen in Verbindung gebracht und werden im Kontext matrixgetriebener Fibrose, muskuloskelettaler Erkrankungen und des Umbaus des Tumormikromilieus untersucht.

Das GLT25D1 CRISPR/Cas9-KO-Plasmid (h) ist ein Pool von Plasmiden, die für die gezielte Disruption des COLGALT1-Gens in human-Zelllinien entwickelt wurden. Jedes Plasmid koexprimiert eine einzigartige Single-Guide-RNA (sgRNA), die auf eine bestimmte Stelle innerhalb des COLGALT1-Gens abzielt, zusammen mit der Streptococcus pyogenes Cas9-Nuklease. Die Plasmide kodieren zudem für GFP, was die fluoreszente Identifizierung und Anreicherung erfolgreich transfizierter Zellen mittels Fluoreszenzmikroskopie oder Durchflusszytometrie ermöglicht.

Das Multi-Guide-Design erhöht die Wahrscheinlichkeit, dass Insertionen oder Deletionen (Indels) entstehen, die den offenen Leserahmen von COLGALT1 nach der Cas9-vermittelten Bildung von Doppelstrangbrüchen unterbrechen. Durch das CRISPR/Cas9-System verursachte DNA-Brüche werden über endogene NHEJ-Wege (Non-Homologous End Joining) repariert, was häufig zu Frameshift-Mutationen führt, die die GLT25D1-Proteinexpression aufheben.

Dieses CRISPR-Knockout-System ermöglicht die effiziente Erzeugung von COLGALT1-defizienten Zellmodellen zur Untersuchung der GLT25D1-Signalübertragung, für funktionelle Genomstudien, in der Krebsbiologieforschung sowie zur Bewertung therapeutischer Reaktionen in menschlichen Zelllinien.

Hauptmerkmale

• sgRNAs, die auf COLGALT1-Exone abzielen, die für die GLT25D1-Funktion entscheidend sind
  Ko-Expression von SpCas9 und sgRNA aus einem einzigen Plasmid zur vereinfachten Verabreichung
  GFP-Reporter zur Identifizierung transfizierter Zellen
  Pool von Plasmiden, die auf mehrere COLGALT1-Genomstellen abzielen, um die Knockout-Effizienz zu verbessern
  Kompatibel mit der Verabreichung durch Transfektion

Designvarianten

CRISPRs +/- HDRs

• gRNAs, die vom GLT25D1 CRISPR/Cas9-KO-Plasmid (h) und vom GLT25D1 CRISPR/Cas9-KO-Plasmid (h2) kodiert werden, zielen auf unterschiedliche Stellen innerhalb des COLGALT1-Lokus ab. Es kann ein oder beide Targeting-Designs verfügbar sein. Siehe „Verwandte Produkte“ für Verfügbarkeit.
  HDR-Donorkonstrukte, kodiert durch das GLT25D1 HDR-Plasmid (h) und GLT25D1 HDR-Plasmid (h2) kodiert, enthalten eine Puromycin-Resistenzkassette und einen RFP-Reporter, flankiert von COLGALT1-Homologiearmen, um die homologe Reparatur an definierten COLGALT1-Zielstellen entsprechend den CRISPR/Cas9-KO-Designs zu unterstützen. Die Verfügbarkeit von HDR-Donoren kann variieren. Siehe „Verwandte Produkte“ für Verfügbarkeit.

Nur für Forschungszwecke. Nicht für diagnostische oder therapeutische Zwecke bestimmt.