Plásmido CRISPR de Activación (h) GLP-1R: sc-400847-ACT

GLP1R codifica el receptor del péptido similar al glucagón tipo 1 (GLP-1R), un GPCR de clase B que se acopla principalmente a Gs para estimular la adenilato ciclasa, aumentar el cAMP y activar las vías de señalización de PKA y EPAC. En las células β pancreáticas, la señalización de GLP-1R potencia la secreción de insulina estimulada por glucosa y modula programas génicos vinculados a la detección de nutrientes y a la capacidad secretora, mientras que en tejidos extrapancreáticos influye en circuitos reguladores neuronales y gastrointestinales. La comunicación cruzada de las vías aguas abajo puede implicar transcripción dependiente de CREB, señalización PI3K–AKT y procesos dependientes de calcio que moldean la excitabilidad celular y la secreción. La expresión o señalización alteradas de GLP1R se han estudiado en el contexto de la desregulación metabólica, incluidos fenotipos asociados a diabetes y obesidad, así como respuestas de estrés de las células β.

GLP-1R El plásmido de activación CRISPR (h) proporciona un enfoque específico y no destructivo para regular al alza la expresión endógena de GLP1R sin alterar la secuencia de ADN subyacente.

GLP-1R El plásmido de activación CRISPR (h) es un sistema mediador de activación sinérgica (SAM) de tres plásmidos diseñado para la regulación al alza transcripcional altamente eficiente y específica del locus GLP1R en líneas celulares humanas. El sistema se basa en una Cas9 catalíticamente inactiva (dCas9) que porta dos mutaciones inactivadoras (D10A y N863A) que eliminan la actividad nucleasa al tiempo que conservan la unión al ADN. Esta dCas9 se fusiona con VP64, un potente activador transcripcional, y se coexpresa con un gen de resistencia a la blasticidina para la selección. El segundo plásmido codifica la proteína de fusión MS2-p65-HSF1, un complejo activador secundario que actúa en conjunto con dCas9-VP64, junto con un gen de resistencia a la higromicina. El tercer plásmido codifica un ARN guía (sgRNA) específico del objetivo de 20 nt fusionado a dos aptámeros de ARN MS2 que reclutan el complejo MS2-p65-HSF1 al sitio de activación, acompañado de un gen de resistencia a la puromicina. Los tres plásmidos se administran en una proporción de masa de 1:1:1 para una expresión equilibrada de todos los componentes del sistema.

Una vez ensamblado en el locus diana, el complejo SAM se une aproximadamente 200 pb aguas arriba del sitio de inicio transcripcional GLP1R, donde VP64, p65 y HSF1 actúan de forma coordinada para reclutar la maquinaria transcripcional e impulsar la regulación al alza de la expresión endógena de GLP-1R. A diferencia de la Cas9 con actividad nucleasa, dCas9 no introduce roturas de doble cadena ni modifica la secuencia genómica, preservando el locus nativo GLP1R y permitiendo el estudio de las respuestas transcripcionales dependientes de GLP-1R en el locus endógeno, lo que la convierte en una herramienta valiosa para estudios funcionales, la identificación de genes diana y la modelización de la restauración de la vía GLP-1R en células tumorales con expresión de GLP1R silenciada o reducida.

Sólo para uso en investigación. No destinado a uso diagnóstico o terapéutico.