Plasmide CRISPR/Cas9 KO GLG1 (m): sc-422869

Présentation

Glg1 code pour GLG1, une glycoprotéine associée à l’appareil de Golgi impliquée dans le tri et le trafic des protéines au sein de la voie sécrétoire, contribuant au bon traitement des cargos et à leur localisation correcte dans l’ensemble du système endomembranaire. Grâce à sa résidence golgienne et au contexte de glycosylation luminale, GLG1 participe au transport régulé de protéines qui influencent les interactions cellule–cellule et la communication avec la matrice extracellulaire. Des altérations de l’organisation du Golgi et du traitement des glycoprotéines sont fréquemment associées à une dérégulation de l’adhérence, de la migration et des réponses au stress, faisant de Glg1 un point d’entrée pertinent pour étudier comment des perturbations de la voie sécrétoire remodèlent les phénotypes cellulaires. Dans des modèles murins et des systèmes de cellules primaires, la perturbation de Glg1 peut être mise à profit pour analyser, au niveau des voies, les conséquences d’un dysfonctionnement du Golgi sur la signalisation et la protéostasie.

Le plasmide CRISPR/Cas9 KO GLG1 (m) est un ensemble de plasmides conçus pour la disruption ciblée du gène Glg1 dans les lignées cellulaires mouse. Chaque plasmide co-exprime un ARN guide unique (sgRNA) ciblant un site distinct au sein du Glg1, ainsi que la nucléase Cas9 de Streptococcus pyogenes. Les plasmides codent également pour la GFP, ce qui permet l'identification par fluorescence et l'enrichissement des cellules transfectées avec succès par microscopie à fluorescence ou cytométrie en flux.

La conception multi-guide augmente la probabilité de générer des insertions ou des délétions (indels) qui perturbent le cadre de lecture ouvert Glg1 à la suite de la formation de cassures double brin médiées par Cas9. Les cassures d'ADN introduites par le système CRISPR/Cas9 sont réparées par des voies endogènes de jonction non homologue (NHEJ), ce qui entraîne fréquemment des mutations par décalage du cadre de lecture qui suppriment l'expression de la protéine GLG1.

Ce système de knock-out CRISPR permet la génération efficace de modèles cellulaires déficients en Glg1 pour l'étude de la signalisation de GLG1, les études de génomique fonctionnelle, la recherche en biologie du cancer et l'évaluation des réponses thérapeutiques dans des lignées cellulaires humaines.

Caractéristiques principales

• sgRNA ciblant le ou les exons de Glg1 essentiels à la fonction de GLG1
  Co-expression de SpCas9 et de sgRNA à partir d'un seul plasmide pour une administration simplifiée
  Rapporteur GFP pour l'identification des cellules transfectées
  Pool de plasmides ciblant plusieurs sites génomiques de Glg1 pour améliorer l'efficacité du knock-out
  Compatible avec l'administration par transfection

Variantes de conception

CRISPR +/- HDR

• Les gRNA codés par le GLG1 plasmide CRISPR/Cas9 KO (m) et le GLG1 plasmide CRISPR/Cas9 KO (m2) ciblent des sites distincts au sein du locus Glg1. Une ou les deux conceptions de ciblage peuvent être disponibles. Voir les produits associés pour connaître la disponibilité.
  Les constructions donneuses HDR codées par le GLG1 plasmide HDR (m) et le GLG1 (m2) contiennent une cassette de résistance à la puromycine et un rapporteur RFP flanqué de bras d'homologie Glg1 pour permettre la réparation dirigée par homologie au niveau de sites cibles Glg1 définis correspondant aux conceptions CRISPR/Cas9 KO. La disponibilité des donneurs HDR peut varier. Voir les produits associés pour connaître la disponibilité.

Réservé à la recherche. N'est pas destiné à un usage diagnostique ou thérapeutique.