Plasmide CRISPR d'Activation (h) GLCNE: sc-406100-ACT

Le gène humain **GNE** code l’enzyme bifonctionnelle **UDP‑GlcNAc 2‑épimérase/N‑acétylmannosamine kinase (GLCNE)**, qui catalyse les étapes limitantes de la biosynthèse de l’acide sialique en convertissant l’UDP‑GlcNAc en ManNAc et en phosphorylant le ManNAc en **ManNAc‑6‑phosphate**. En contrôlant la production de **CMP‑acide sialique**, GLCNE influence la sialylation des glycoprotéines et des glycolipides, avec des effets sur les interactions cellule–cellule, la signalisation des récepteurs et la stabilité des protéines membranaires. Ce nœud métabolique s’intègre aux voies de l’hexosamine et des sucres nucléotidiques, qui façonnent le remodelage des glycoconjugués au cours du développement et des processus liés à l’immunité. Des variations pathogènes de **GNE** sont associées à la **myopathie liée à GNE** et ont été reliées à une dérégulation plus large de phénotypes cellulaires dépendants de la glycosylation, pertinents pour la biologie neuromusculaire et la recherche en glycobiologie.

GLCNE Le plasmide d'activation CRISPR (h) offre une approche ciblée et non destructive pour réguler à la hausse l'expression endogène de GNE sans modifier la séquence d'ADN sous-jacente.

GLCNE Le plasmide d'activation CRISPR (h) est un système SAM (synergistic activation mediator) à trois plasmides conçu pour une régulation à la hausse hautement efficace et spécifique du locus GNE dans des lignées cellulaires humaines. Le système s'articule autour d'une Cas9 catalytiquement inactive (dCas9) portant deux mutations inactivantes (D10A et N863A) qui éliminent l'activité nucléase tout en préservant la liaison à l'ADN. Cette dCas9 est fusionnée à VP64, un puissant activateur transcriptionnel, et est co-exprimée avec un gène de résistance à la blasticidine pour la sélection. Le deuxième plasmide code pour la protéine de fusion MS2-p65-HSF1, un complexe activateur secondaire qui agit de concert avec dCas9-VP64, ainsi qu'un gène de résistance à l'hygromycine. Le troisième plasmide code pour un ARN guide (sgRNA) de 20 nt spécifique de la cible, fusionné à deux aptamères d'ARN MS2 qui recrutent le complexe MS2-p65-HSF1 vers le site d'activation, accompagné d'un gène de résistance à la puromycine. Les trois plasmides sont délivrés dans un rapport massique de 1:1:1 pour une expression équilibrée de tous les composants du système.

Une fois assemblé au locus cible, le complexe SAM se lie à environ 200 pb en amont du site de départ de la transcription GNE, où VP64, p65 et HSF1 agissent de concert pour recruter la machinerie transcriptionnelle et induire une régulation à la hausse de l'expression endogène de GLCNE. Contrairement à Cas9, qui possède une activité nucléase, dCas9 n'introduit pas de cassures double brin ni ne modifie la séquence génomique, préservant ainsi le locus GNE natif et permettant l'étude des réponses transcriptionnelles dépendantes de GLCNE au niveau du locus endogène, ce qui en fait un outil précieux pour les études fonctionnelles, l'identification de gènes cibles et la modélisation de la restauration de la voie GLCNE dans les cellules tumorales présentant une expression de GNE silencée ou réduite.

Réservé à la recherche. N'est pas destiné à un usage diagnostique ou thérapeutique.