Plasmide CRISPR/Cas9 KO Ggta1 (m): sc-420545

Présentation

Ggta1 code l’alpha-1,3-galactosyltransférase 1, une glycosyltransférase localisée dans l’appareil de Golgi qui catalyse le transfert de galactose afin de générer l’épitope Galα1-3Gal sur les glycoprotéines et les glycolipides. En façonnant les structures glycanes terminales, Ggta1 influence la maturation des protéines, la glycosylation membranaire et les interactions cellule–cellule ou cellule–matrice, susceptibles d’affecter la reconnaissance immunitaire et la signalisation inflammatoire. Chez la souris, l’activité de Ggta1 est pertinente pour les études sur la biologie des xénoantigènes et les réponses médiées par le complément et/ou les anticorps, et sert de modèle pour des mécanismes immunitaires dépendants de la glycosylation. L’inactivation de cette enzyme est donc utile pour analyser comment les épitopes glycanes régulent la liaison aux récepteurs, la compatibilité tissulaire et les voies immunitaires en aval.

Le plasmide CRISPR/Cas9 KO Ggta1 (m) est un ensemble de plasmides conçus pour la disruption ciblée du gène Ggta1 dans les lignées cellulaires mouse. Chaque plasmide co-exprime un ARN guide unique (sgRNA) ciblant un site distinct au sein du Ggta1, ainsi que la nucléase Cas9 de Streptococcus pyogenes. Les plasmides codent également pour la GFP, ce qui permet l'identification par fluorescence et l'enrichissement des cellules transfectées avec succès par microscopie à fluorescence ou cytométrie en flux.

La conception multi-guide augmente la probabilité de générer des insertions ou des délétions (indels) qui perturbent le cadre de lecture ouvert Ggta1 à la suite de la formation de cassures double brin médiées par Cas9. Les cassures d'ADN introduites par le système CRISPR/Cas9 sont réparées par des voies endogènes de jonction non homologue (NHEJ), ce qui entraîne fréquemment des mutations par décalage du cadre de lecture qui suppriment l'expression de la protéine Ggta1.

Ce système de knock-out CRISPR permet la génération efficace de modèles cellulaires déficients en Ggta1 pour l'étude de la signalisation de Ggta1, les études de génomique fonctionnelle, la recherche en biologie du cancer et l'évaluation des réponses thérapeutiques dans des lignées cellulaires humaines.

Caractéristiques principales

• sgRNA ciblant le ou les exons de Ggta1 essentiels à la fonction de Ggta1
  Co-expression de SpCas9 et de sgRNA à partir d'un seul plasmide pour une administration simplifiée
  Rapporteur GFP pour l'identification des cellules transfectées
  Pool de plasmides ciblant plusieurs sites génomiques de Ggta1 pour améliorer l'efficacité du knock-out
  Compatible avec l'administration par transfection

Variantes de conception

CRISPR +/- HDR

• Les gRNA codés par le Ggta1 plasmide CRISPR/Cas9 KO (m) et le Ggta1 plasmide CRISPR/Cas9 KO (m2) ciblent des sites distincts au sein du locus Ggta1. Une ou les deux conceptions de ciblage peuvent être disponibles. Voir les produits associés pour connaître la disponibilité.
  Les constructions donneuses HDR codées par le Ggta1 plasmide HDR (m) et le Ggta1 (m2) contiennent une cassette de résistance à la puromycine et un rapporteur RFP flanqué de bras d'homologie Ggta1 pour permettre la réparation dirigée par homologie au niveau de sites cibles Ggta1 définis correspondant aux conceptions CRISPR/Cas9 KO. La disponibilité des donneurs HDR peut varier. Voir les produits associés pour connaître la disponibilité.

Réservé à la recherche. N'est pas destiné à un usage diagnostique ou thérapeutique.