Plasmide CRISPR d'Activation (h) GGT5: sc-405055-ACT

Le gène humain **GGT5** code la gamma‑glutamyltransférase 5, une enzyme de surface cellulaire qui hydrolyse la liaison gamma‑glutamyl du glutathion et de conjugués apparentés afin de soutenir le renouvellement extracellulaire du glutathion et la récupération des acides aminés. Par son rôle dans le cycle gamma‑glutamyl, GGT5 contribue à l’homéostasie rédox, à la disponibilité de la cystéine et au métabolisme d’intermédiaires dérivés du glutathion, avec des effets en aval sur la signalisation liée au stress oxydant et les processus cellulaires de détoxification. L’activité de GGT5 a été étudiée dans des contextes impliquant des microenvironnements inflammatoires, le métabolisme des lipides et des xénobiotiques, ainsi que la régulation tissulaire de l’équilibre oxydatif, ce qui la rend pertinente pour des voies associées aux maladies où l’état rédox et la gestion du glutathion sont perturbés. Ces caractéristiques font de GGT5 un nœud utile pour analyser comment le catabolisme du glutathion influence la signalisation, l’adaptation métabolique et les réponses cellulaires au stress.

GGT5 Le plasmide d'activation CRISPR (h) offre une approche ciblée et non destructive pour réguler à la hausse l'expression endogène de GGT5 sans modifier la séquence d'ADN sous-jacente.

GGT5 Le plasmide d'activation CRISPR (h) est un système SAM (synergistic activation mediator) à trois plasmides conçu pour une régulation à la hausse hautement efficace et spécifique du locus GGT5 dans des lignées cellulaires humaines. Le système s'articule autour d'une Cas9 catalytiquement inactive (dCas9) portant deux mutations inactivantes (D10A et N863A) qui éliminent l'activité nucléase tout en préservant la liaison à l'ADN. Cette dCas9 est fusionnée à VP64, un puissant activateur transcriptionnel, et est co-exprimée avec un gène de résistance à la blasticidine pour la sélection. Le deuxième plasmide code pour la protéine de fusion MS2-p65-HSF1, un complexe activateur secondaire qui agit de concert avec dCas9-VP64, ainsi qu'un gène de résistance à l'hygromycine. Le troisième plasmide code pour un ARN guide (sgRNA) de 20 nt spécifique de la cible, fusionné à deux aptamères d'ARN MS2 qui recrutent le complexe MS2-p65-HSF1 vers le site d'activation, accompagné d'un gène de résistance à la puromycine. Les trois plasmides sont délivrés dans un rapport massique de 1:1:1 pour une expression équilibrée de tous les composants du système.

Une fois assemblé au locus cible, le complexe SAM se lie à environ 200 pb en amont du site de départ de la transcription GGT5, où VP64, p65 et HSF1 agissent de concert pour recruter la machinerie transcriptionnelle et induire une régulation à la hausse de l'expression endogène de GGT5. Contrairement à Cas9, qui possède une activité nucléase, dCas9 n'introduit pas de cassures double brin ni ne modifie la séquence génomique, préservant ainsi le locus GGT5 natif et permettant l'étude des réponses transcriptionnelles dépendantes de GGT5 au niveau du locus endogène, ce qui en fait un outil précieux pour les études fonctionnelles, l'identification de gènes cibles et la modélisation de la restauration de la voie GGT5 dans les cellules tumorales présentant une expression de GGT5 silencée ou réduite.

Réservé à la recherche. N'est pas destiné à un usage diagnostique ou thérapeutique.