Not CRISPR data: the image illustrates antibody quality for visualizing CRISPR experiment results.
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Gelsolin Double Nickase Plasmid (h): sc-401005-NIC
- Zielspezies: human
- 20 µg transfektionsfertige, aufgereinigte Plasmid DNA; geeignet für 20 Transfektionen
- Das Gelsolin Double Nickase Plasmid (h) wird als Plasmid-Paar geliefert. Die einzelnen Plasmide kodieren für eine D10A mutierte Cas9 Nuklease sowie für je eine unterschiedliche, zielspezifische 20nt guide RNA (gRNA) Sequenz. Dies erlaubt eine hohe Knockout-Effizienz bei gleichzeitig größerer Spezifität als das entsprechende CRISPR/Cas9 KO Plasmid
- gRNA Sequenzpaare liegen ca. 20 bp auseinander um ein spezifisches Cas9-vermitteltes "Double Nicking" der genomischen DNA zu erlauben und so im Resultat den Effekt eines Doppelstrangbruchs nachzuahmen.
- Ein Plasmid kodiert für ein Puromycin-Resistenzgen zur Selektion von stabilen Knockout-Zellen. Das andere Plasmid kodiert für ein GFP-Gen für den visuellen Nachweis der Transfektion
- Gelsolin Double-Nickase-Plasmid (h) und Gelsolin Double-Nickase-Plasmid (h2) kodieren unterschiedliche gepaarte gRNA-Designs, die auf GSN abzielen. Möglicherweise ist eines oder sind beide Designs verfügbar
- Nach der Transfektion kann die Effizienz des Gen-Knockouts per Western Blot oder histologisch mit folgendem Antikörper überprüft werden: Gelsolin: sc-514502
Bestellinformation
| Produkt | Katalog # | EINHEIT | Preis | ANZAHL | Favoriten | |
Gelsolin Double Nickase Plasmid (h) | sc-401005-NIC | 20 µg | $410.00 | |||
Gelsolin Double Nickase Plasmid (h2) | sc-401005-NIC-2 | 20 µg | $410.00 |
GSN kodiert Gelsolin, ein Ca²⁺-reguliertes, aktinbindendes Protein, das Aktinfilamente durchtrennt und kappen kann, um das Zytoskelett umzubauen und Zellform, Adhäsion und Motilität zu steuern. Durch die Regulation der Aktindynamik beeinflusst Gelsolin Prozesse wie Endozytose, Membrantransport und Apoptose und greift in Signalnetzwerke ein, darunter Phosphoinositid- und Rho-Familien-GTPase-Signalwege, die den zytoskelettalen Turnover koordinieren. Eine veränderte Aktivität oder Expression von Gelsolin wird mit fehlregulierter Zellmigration und Invasionsphänotypen in Verbindung gebracht und in unterschiedlichen Kontexten untersucht, darunter Entzündung, Neurobiologie und kardiovaskuläres Remodeling. Pathogene Varianten in GSN sind außerdem mit amyloidogenen Proteinfehlfaltungserkrankungen assoziiert, was seine Bedeutung für die Proteinhomöostase und eine extrazellulärmatrixbezogene Pathologie unterstreicht.
Gelsolin Das Double-Nickase-Plasmid (h) besteht aus einem aufeinander abgestimmten Plasmidpaar, das für die hochspezifische Bearbeitung des GSN-Lokus in human-Zelllinien entwickelt wurde. Jedes Plasmid exprimiert eine Cas9-D10A-Nickase und eine spezifische sgRNA, die auf entgegengesetzte DNA-Stränge innerhalb von GSN abzielt. Wenn sie auf benachbarte Stellen auf entgegengesetzten DNA-Strängen gerichtet sind, erzeugen die beiden Nickasen versetzte Einzelstrang-Schnitte, die zusammen einen versetzten Doppelstrangbruch erzeugen, was eine koordinierte On-Target-Aktivität beider Guides erfordert. Der resultierende DNA-Bruch wird durch endogene zelluläre Reparaturwege behoben, meist durch nicht-homologe Endverknüpfung (NHEJ), was zu Insertionen oder Deletionen führt, die die GSN-Funktion stören. Durch die Notwendigkeit einer doppelten sgRNA-Bindung am Zielort erhöht der Doppel-Nick-Ansatz die Spezifität der Bearbeitung und bietet eine komplementäre CRISPR-Strategie für Anwendungen, bei denen eine zusätzliche Kontrolle über die Zielgenauigkeit gewünscht ist.
Um eine effiziente Identifizierung editierter Zellen zu unterstützen, kodiert ein Plasmid GFP zur fluoreszierenden Visualisierung transfizierter Populationen, während das Begleitplasmid ein Puromycin-Resistenzgen für die Antibiotika-Selektion trägt. Zusammen unterstützen diese Merkmale eine effiziente Anreicherung co-transfizierter Populationen und vereinfachen die Validierung von Klonen mit GSN-Störung.
Nur für Forschungszwecke. Nicht für diagnostische oder therapeutische Zwecke bestimmt.