Gelsolin CRISPR/Cas9 KO Plasmid (m): sc-432743

Übersicht

Das murine Gen **Gsn** kodiert **Gelsolin**, ein Ca2+-reguliertes Actin-bindendes Protein, das Actinfilamente durchtrennt, kappt und nucleiert und so den zytoskelettalen Umbau steuert. Durch die Feinabstimmung der Actin-Dynamik trägt Gelsolin zu Veränderungen der Zellform, Motilität, Endozytose und Phagozytose bei und ist mit Signalnetzwerken verknüpft, etwa der Phosphoinositid-Regulation sowie Rho-Familie-GTPase-gekoppelten Signalwegen, die Membransignale mit der Reorganisation des Actin-Zytoskeletts verbinden. Veränderte Gelsolin-Aktivität und -Expression wurden mit fehlregulierter Zellmigration, Entzündungsreaktionen und Gewebeumbau in Verbindung gebracht, was es zu einem nützlichen Knotenpunkt für die Untersuchung zytoskelettgetriebener Phänotypen macht. In Mausmodellen unterstützt eine Perturbation von **Gsn** mechanistische Forschung zu actinabhängigen Prozessen, die für Gefäßbiologie, Neurobiologie und die Funktion von Immunzellen relevant sind.

Das Gelsolin CRISPR/Cas9-KO-Plasmid (m) ist ein Pool von Plasmiden, die für die gezielte Disruption des Gsn-Gens in mouse-Zelllinien entwickelt wurden. Jedes Plasmid koexprimiert eine einzigartige Single-Guide-RNA (sgRNA), die auf eine bestimmte Stelle innerhalb des Gsn-Gens abzielt, zusammen mit der Streptococcus pyogenes Cas9-Nuklease. Die Plasmide kodieren zudem für GFP, was die fluoreszente Identifizierung und Anreicherung erfolgreich transfizierter Zellen mittels Fluoreszenzmikroskopie oder Durchflusszytometrie ermöglicht.

Das Multi-Guide-Design erhöht die Wahrscheinlichkeit, dass Insertionen oder Deletionen (Indels) entstehen, die den offenen Leserahmen von Gsn nach der Cas9-vermittelten Bildung von Doppelstrangbrüchen unterbrechen. Durch das CRISPR/Cas9-System verursachte DNA-Brüche werden über endogene NHEJ-Wege (Non-Homologous End Joining) repariert, was häufig zu Frameshift-Mutationen führt, die die Gelsolin-Proteinexpression aufheben.

Dieses CRISPR-Knockout-System ermöglicht die effiziente Erzeugung von Gsn-defizienten Zellmodellen zur Untersuchung der Gelsolin-Signalübertragung, für funktionelle Genomstudien, in der Krebsbiologieforschung sowie zur Bewertung therapeutischer Reaktionen in menschlichen Zelllinien.

Hauptmerkmale

• sgRNAs, die auf Gsn-Exone abzielen, die für die Gelsolin-Funktion entscheidend sind
  Ko-Expression von SpCas9 und sgRNA aus einem einzigen Plasmid zur vereinfachten Verabreichung
  GFP-Reporter zur Identifizierung transfizierter Zellen
  Pool von Plasmiden, die auf mehrere Gsn-Genomstellen abzielen, um die Knockout-Effizienz zu verbessern
  Kompatibel mit der Verabreichung durch Transfektion

Designvarianten

CRISPRs +/- HDRs

• gRNAs, die vom Gelsolin CRISPR/Cas9-KO-Plasmid (m) und vom Gelsolin CRISPR/Cas9-KO-Plasmid (m2) kodiert werden, zielen auf unterschiedliche Stellen innerhalb des Gsn-Lokus ab. Es kann ein oder beide Targeting-Designs verfügbar sein. Siehe „Verwandte Produkte“ für Verfügbarkeit.
  HDR-Donorkonstrukte, kodiert durch das Gelsolin HDR-Plasmid (m) und Gelsolin HDR-Plasmid (m2) kodiert, enthalten eine Puromycin-Resistenzkassette und einen RFP-Reporter, flankiert von Gsn-Homologiearmen, um die homologe Reparatur an definierten Gsn-Zielstellen entsprechend den CRISPR/Cas9-KO-Designs zu unterstützen. Die Verfügbarkeit von HDR-Donoren kann variieren. Siehe „Verwandte Produkte“ für Verfügbarkeit.

Nur für Forschungszwecke. Nicht für diagnostische oder therapeutische Zwecke bestimmt.